مهندسی ژنتیک و افزایش مقاومت گیاهان به سرمازدگی با ایجاد موتان های باکتری های فاقد هسته یخ

باکتری های فعال هسته یخ (INA) از عواملی هستند که در ایجاد خسارت ناشی از سرمازدگی و یخ زدگی در گیاهان حساس به سرما نقش مهمی دارند. هر تیماری که منجر به کاهش تعداد باکتری های هسته یخ زا یا فعالیت هسته یخ زایی باکتری ها گرددموجب کاهش میزان خسارت یخ زدگی در گیاهان می شود. یکی از این راه ها ایجاد تغییر در ساختار ژنتیکی ژن کد کننده پروتئین inaz می باشد، به طوری که ای پروتئین در باکتری سنتز نگردیده و یا به صورت ناقص ساخته شودو در نتیجه تشکیل هسته های یخ و یخ زدگی در گیاه به تاخیر می افتد، هدف از پژوهش حاضر شناسایی ایزوله های باکتری Pseudomonas putida و ایجاد موتانت های آنها می باشد. به منظور اجرای پژوهش مورد نظر نمونه های گیاهی در بهار از درختان بادام که علائم سرمازدگی را نشان می دادند، جمع آوری وپس از جداسازی و شناسایی استرین های باکتری از بافت گیاهی میزان فعالیت هسته یخ به روش انجماد قطره ای تعیین گردید. با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) حضور و یا عدم حضور ژن ina در ایزوله های باکتری بررسی و ردیابی گردید، الکتروفورز محصول PCR انجام شد و از استرین اپی فیت Erwiniaherbicola حاصل ژن کلون شده inazبه عنوان شاهد مثبت استفاده شد. جهت جهش زایی استرین P.Putida دارای فعالیت هسته یخ، از روش الکتروپورشین و برای جهش زایی در ژن Ice از ترانسپوزون استفاده شد. جهش یافته ها مقاوم با کانامایسین شده و با محیط کشت انتخابی حاوی کانامایسین انتخاب شدند، با بررسی اثر جهش یافته ها روی گیاهچه های خیار، تعدادی از جهش یافته ها علائم یخ زدگی ایجاد نکرده و گیاهچه ها سالم باقی ماندند در حالیکه برخی از جدایه ها و تیمار شاهد مثبت یخ زدگی ایجاد نمودند.

کلیدواژه ها:

مهندسی ژنتیک ، باکتری موتانت ، یخ زدگی ، گیاه