بررسی مولکولی جدایه های رایزوکتونیا عامل شانکر ساقه کلزا با استفاده از روش های rDNA- PCR و PCR-RFLP

قارچ خاکزی رایزوکتونیا یکی از مخرب ترین عوامل بیماری زای گیاهی است که خسارت عمده ای را به محصولات کشاورزی از جمله کلزا وارد می کند. به منظور شناسایی دقیق این قارچ در کلزا که باعث شانکر ساقه می شود، در طی سال های 91 - 90 از گیاهان دارای علائم شانکر در استان های مازندران گلستان نمونه برداری شد. بافت های آلوده پس از انتقال به آزمایشگاه و ضدعفونی سطحی، در محیط کشت آب – آگار WA کشت داده شدند. بعد از رشد قارچ، نوک هیف های قارچ به محیط جدید سیب زمینی - دکستروز – آگار PDA منتقل شدند. با انجام آزمون های مورفولوژیکی، تعیین هسته، گروه آناستوموزی و آزمون بیماری زایی تمامی جدایه ها Rhizoctonia solani تشخیص داده شدند. برای شناسایی مولکولی جدایه ها استخراج DNA صورت گرفت و جدایه ها با روش PCR با پرایمرهای ITS4,5 تکثیر شدند. مقایسه توالی های بدست آمده با توالی های موجود در بانک ژن ) NCBI ( و بلاست جدایه ها، تطابق 99 درصدی جدایه ها را با R. solani نشان داد. هضم آنزیمی محصولات PCR با روش PCR-RFLP و آنزیم های برشگر HincII و AvaII ، الگوی هضم یکسانی را برای تمام جدایه ها نشان داد.

کلیدواژه ها:

رایزوکتونیا ، کلزا ، شانکر ، PCR-RFLP