اثر پروتیین فیوز شده فاکتور رشد اپیدرمی نوترکیب روی رشد لاین های سلولی SKM و MCF7

فاکتور رشد اپیدرمی EGF پروتیینی 6/2 کیلودالتونی است که رشد سلول ها را از طریق اتصال به گیرنده هایش در سطح آنها تحریک می کند. EGF شامل 53 اسیدآمینه است و دارای یک یا تعداد بیشتری توالی تکراری متشکل از شش رزیدو سیستیین می باشد که پیوندهای دی سولفید درون مولکولی را که جهت فعالیت زیستی پروتیین ضروری هستند را تشکیل می دهد. اثر این مولکول روی درمان زخم و سوختگی های پوستی نشان داده شده است. برای تولید EGF نوترکیب با بازدهی بالا و دارای فعالیت زیستی، شرایط بهینه سازی شد. سطح بیان در سویه های T7 shuffle مستعد ترانسفرم شده با استفاده از IPTG در زمان و دمای مناسب القاء و سپس میزان بیان با استفاده از SDS-PAGE سنجیده شد. عمل تخلیص با استفاده از ستون کروماتوگرافی تبادل یونی نیکل سفارز انجام گرفت. سپس مرحله بعدی تخلیص جهت حذف ایمیدازول از نمونه های پروتیین تخلیص شده انجام شد. از آنجا که برای اثبات فعالیت ویژه و بررسی اثر EGF روی تحریک رشد سلول ها و تکثیر آنها نیاز به پروتیین نوترکیب کاملا خالص داشتیم، در این تحقیق با استفاده از ستون آمیکون فیلتر EGF نمک زدایی شده و ایمیدازول حذف گردید. سپس برای القای رشد سلول ها، غلظت های متفاوت EGF را بر روی لاین های سلولی MCF و 7 SKM استفاده کردیم. نتایج نشان دادند که میزان رشد سلول ها در غلظت های متفاوت EGF افزایش می یابد

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد اپیدرمی فیوز شده ، بهینه سازی کدونی ، نمک زدایی ، MCF7 ، SKM