افزایش سطح تولید پروتئینهای نوترکیب در گیاهان با بهره گیری از بازدارنده سرکوبگری ژنی

پروتئین p19 از ویروس کوتولگی گوجه فرنگی دارای اثر بازدارنده گی قوی از سرکوبگری ژنی پس از نسخه برداری است و سبب افزایش سطح تولید پروتئین های نوترکیب در گیاهان می شوند. در پژوهش حاضر، کارایی پروتئین p19 در افزایش سطح تولید پروتئینهای نوترکیب در روش بیان موقت با واسطه اگروباکتریوم آزمون شد. به این منظور، برچسب تعیین کننده T7 و Hexa- histidin با کمک واکنش های زنجیره های پلیمراز در بخش های رمز دهنده ژنهای bphF, bphE, bphA و bphG جایگزین شدند. این ژنها رمیز دهنده برای بخش های چهارگانه آنزیم باکتریایی (biphenyl dioxygenase (BPDO هستند و در کاتابولیسم مواد آلوده مهم خاک مانند (polychlorinated biphenyls (PCBs نقش دارند، این ژنها در ناقل pGreen0029 کلون شدند. سپس این ژنهای کلون شده در ترکیبات گوناگون و همراه یا بدون p19 با واسطه اگروباکتریوم به فضای داخل برگهای Nicotiana benthamiana اگرواینفیلتره شدند. آزمون وسترن بلات نشان داد که استفاده از پروتئینهای p19 در روش بیان موقت با واسطه اگروباکتریوم در افزایش سطح تولید پروتئین های نوترکیب مؤثر است. همچنین پروتئین های bphE, bphA و bphG بطور پیگیر در سطح بالا در برگهای گیاهان N. benthamiana تولید شده و بوسیله آزمون وسترن بلات ردیابی شدند. در حالیکه ردیابی پروتئین bphF مشکل بود. علاوه بر این، نتیجه های بدست آمده نان دادند که با کمک این روش می توان بیان موقت وب بطور همزمان چندین ژن را به آسانی بدست آورد، چنانکه در بیان همزمان ژنهای bphA و bphE همچنان پروتئین های آنها در سطح بسیار بالا در برگهای N. benthamiana تولید شدند.

کلیدواژه ها:

پروتئین P19 ، پروتئین های نوترکیب ، بازدارنده سرکوبگری ژنی