کلونینگ و بیان ربوتین NS1 ویروس آنفولانزا H1N1 در باکتری E.coli سویه BL21

پیشینه: ویروس آنلفوانزا یک پاتوژن جهانی برای دستگاه تنفسی می باشد که به طور متناوب تحت تأثیر تغییرات آنتی ژنیک قرار می گیرد. از پروتئینهای شاخص آنتی ژنیک آن، سه پروتئین سطحی H.A, N.A , Matrix و هفت پروتئین داخل هسته ای که عبارتند از: PB1, PB2, PA, H2, H1, N.P, NS2, NS1. در این ارگانیسم NS1 نقش بسیار مهمی دارد. یکی از راههای تولید پروتئین بعنوان دارو یا واکسن استفاده از سیستمهای باکتریایی است که در این پروژه با استفاده از این سیستم قصد بیان ژن NS1 ویروس آنفلوانزا و بررسی بیشتر این پروتئین برای کارهای تحقیقی دیگر را داشتیم. مواد و روش ها: به علت خطرات کشت ویروس، ژن مورد نظر در وکتور پلاسمیدی سفارش داده شد. جهت کلون مجدد در وکتور بیان، با آنزیمهای HindIII,KpnI دو سر ژن برش داده شد و در وکتور pQE30 کلون گردید. مراحل تأئید cloning با تعیین توالی صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با القای IPTG در سلول بیانی باکتریایی بیان شد. در نهایت تأئید بیان پروتئین با Western Blot صورت گرفت. نتیجه و بحث: ژن NS1 با موفقیت در وکتور مورد نظر ک لون شد و پروتئین بیان شده هم بر روی ژل SDS-PAGE مشاهده شد و توسط آنتی بادی اختصاصی با وسترن بلانینگ تأئید گردید.