طراحی و ساخ ناقل نوترکیب pART27Lac حاوی ژن لاکتوفرین جهت انتقال به گیاه به منظور ایجاد مقاومت نسبت به بیماری های گیاهی

طبق یک تخمین محافظه کارانه، بیماری ها، حشرات و علف های هرز در سطح جهانی سالانه بین 31 تا 42 درصد محصولات کشاورزی را نابود یا از تولید آنها جلوگیری می کنند. اگر متوسط میزان خسارت را 36/5 درصد بگیریم، سهم بیماری ه ا، حشرات و علف های هرز در این خ سارت به ترتیب 14/1 درصد، 10/2 درصد و 12/2 درصد شده است. طی یکصد سال گذشته، کنترل بیماری ها و سایر آفات گیاهی به طور فزاینده ای به استعمال مواد شیمیایی سمی وابسته بوده است که باعث اثرات سوء بر انسان و محیط زیست می شوند. لذا بهره گیری از روش های غیر مبتنی بر مواد شیمیایی سمی برای مبارزه با بیماری ها و آفات گیاهی ضروری بنظر می رسد. یکی از این روش ها، مقاوم سازی گیاهان با استفاده از مهندسی ژنتیک و بیوتکنولوژی است. در این تحقیق mRNA ژن لاکتوفرین که یک پروتئین چندعملکرده و ضد میکروبی قوی است، از بافت پستانی شتر عربی با استفاده از کیت RNXPLUS جداسازی شد. پس از سنتز رشته اول cDNA با کیت سنتز فرمنتاز، به طور کامل CDS ژن جداسازی شده و ابتدا در ناقل همسانه سازی PTZ57R/T با انتهای صاف وارد شد و پس از انتقال به E.coli و تأئید تراریختی، ناقل نوترکیب حاصل استخراج و در معرض هضم آنزیمی قرار گرفت. سپس قطعه برش خورده حاصل در ناقل دوگانه pART27 برش خورده وارد و با روش الکتروپوراسیون به E.coli منتقل گردید و کلنی های رشد یافته در محیط با 50 میلی گرم در لیتر کانامایسین توسط روش های Colony PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی مورد آنالیز و تأئید قرار گرفت.

کلیدواژه ها:

ناقل نوترکیب ، ژن لاکتوفرین ، بیماری های گیاهی ، مهندسی ژنتیک