همسانه سازی راه انداز اختصاصی آندوسپرم زیرواحد با وزن مولکولی پائین گلوتنین از گندم ایرانی

یکی از مسائل مرتبط با تراریخته سازی غلات جهت تغییر ترکیب پروتئین آندوسپرم، دسترسی به راه اندازهای اختصاصی آندوسپرم قدرتمند است. هدف این کار، دستیابی به چنین راه اندازی است. راه انداز زیرواحد با وزن مولکولی پائین گلوتنین گندم به دلیل بیان اختصاصی آندوسپرم و غنی رودن ذخیره محصول آن در بذر گندم (70-60% گلوتنین) که نمایانگر قدرت بالای آن است، انتخاب گردید. در راستای این هدف، DNA کل گندم در مرحله دو برگچه ای با استفاده از روش CTAB استخراج گشت. ناحیه راه انداز توسط PCR و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی طراحی شده بر اساس بانک اطلاعات نوکلئوتیدی NCBI تکثیر شد. قطعه هدف پس از اتصال به حامل همسانه سازی pGEM-T جهت تراریخته سازی سلولهای مستعد باکتریایی به کار گرفته شد. کلنی های سفید که حضور قطعه درجی در انها با کلنی PCR تأئید شده بود برای کشت مایع و استخراج پلاسمید انتخاب شدند. حضور قطعه درجی از طریق برش آنزیمی با اطمینان بیشتری مورد تأئید قرار گرفت و پلاسمیدها به منظور توالیبابی به شرکت Bioneer کره جنوبی ارسال شدند. بررسی نتایج توالیبابی حاکی از جداسازی موفق راه انداز LMW-GS بود که می تواند به عنوان ابزار بیان قدرتمندی در فرایند تراریخته سازی گندم و احتمالاً دیگر غلات مودر استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

آندوسپرم ، راه انداز اختصاصی ، گلوتنین ، گندم ، همسانه سازی