ردیابی همزمان ویروسهای موزائیک معمولی و موزائیک معمولی نکروز لوبیا با استفاده ازMultiplex-RT-PCR

ویروسهای موزائیک معمولی لوبیا bean common mosaic virus, BCMV و ویروس موزائیک نکروز معمولی لوبیاbean common mosaic necrotic virus, BCMNV از ویروسهای بذربرد لوبیا میباشند که به طور جدی باعث افت محصول و کیفیت لوبیا میشوندوقوع ویروسهای یاد شده از مناطق مختلف کاشت لوبیا گزارش شده است. بدلیل بذربرد بودن این ویروسها، کاشت بذور سالم اولین گام اساسی برای جلوگیری از وقوع این ویروسها در مزرعه میباشد. از آنجا که این دو ویروس از لحاظ سرولوژیکی بسیار نزدیک به هم هستند تفکیک این دو از هم دشوار است. بدین منظور معرفی روشی دقیق، سریع و حساس برای ردیابی ویروسهای ذکر شده درمزارع کشت لوبیا میتواند نقش مهمی در کنترل انتشار و خسارت آنها داشته باشد. از اینرو، در این پژوهش روشMultiplex RT-PCRبرای ردیابی همزمانBCMNV و BCMVو نیز ژن18S rRNAبعنوان کنترل داخلی استفاده شد. برای این منظور بذور لوبیا از بازار تهیه و کاشته شدند. ابتدا حضور ویروس در گیاهان رشد کرده با استفاده ازDAC-ELISAردیابی و سپسRNAکل از گیاه استخراج شد.cDNAبا استفاده ازRandom Hexamersساخته شد. ویروسهای یاد شده و ژن18S rRNAبا استفاده از آغازگرهای اختصاصی هم بصورت جداگانه و هم در ترکیب با یکدیگر بطور موفقیت آمیز ردیابی شده و تکثیر همزمان بخشهای مورد انتظار یعنی قطعات 421 و500 و 708 جفت بازی به ترتیب برایBCMNV 18 و S rRNA ،BCMVصورت گرفت. نتایج این پژوهش نشان داد، این روش قابلیت ردیابی همزمان این دو ویروس را در 80 نانوگرم ازRNAکل دارد.

کلیدواژه ها:

لوبیا ، بذربرد ، Multiplex RT-PCR ، ویروس ، 18S Rrna