جداسازی و همسانه سازی ژن پروتئین پوششی ویروس آبله آلو(Plum pox virus) در ناقل بیانی پروکاریوتیک

ویروس آبله آلو یک بیمارگر مهم ویروسی درختان میوه هسته دار در بسیاری از نقاط د نی ا از جمله ای ران است. از مهمتر ین روشها ی تشخیص این ویروس استفاده از تکنیک الایزا با استفاده از آنتی بادی های پلی و منوکلونال است. همسانه ساز ی ژن پروت ئین پوششی ویروس و تولید پروتئین نوترکیب روشی نوین در تولید آنتی ژن خالص برای تولید آنتی بادی به شمار م ی رود. در ای ن تحقی ق پس از استخراجRNAکل از بافت های برگی آلوده بهPPVو سنتزcDNAژن پروتئین پوششی ویروس با استفاده از آغازگر های طراحی شده دارای توالی برشی آنزیم هایXhoI و SalIتکثیر گردید. قطعه تکثیری پس از خالص سازی در ناقلpTZ57R/Tهمسانه سازی گردید وبه سلولهای باکتریاییE. coliاسترینDH5αمستعد منتقل و روی محیط کشتLBحاوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین کشت داده شد. به منظور اطمینان از تراریخت شدن باکتری ها با پلاسمید نوترکیب، چند کلونی های سف ید رشد یافته مورد آزمونColony-PCRو نیزپلاسمید استخراج شده از آنها مورد تعیین توالی و هضم آنزیمی قرار گرفت که هر سه آزمون مؤید تراریختی باکتری ها بود. در ادامه پس از هضم آنزیمی ناقل نوترکیب و نیز ناقل بیانی پروکاریوتیکpET-28aبا آنزیم، ژن پروتئین پوششی در ناقل بیانی همسانه سازی گردیدو به سلولهای باکتریایی مستعد انتقال داده شد و پس از کشت روی محیط حاوی کانامایسین، مجدداً کلونی های رشد یافته مورد ارزیابی قرار گرفت. سازه بیانی تهیه شده،pET-PPV-CPبرای تولید انبوه پروتئین پوششی نوترکیب مورد استفاده قرار می گیرد

کلیدواژه ها:

ویروس آبله آلو ، پروتئین پوششی ، الایزا ، همسانه سازی ، پلاسمید