طراحی و ساخت سازه ی نوترکیبELP-Inteinجهت تخلیص فاکتور رشد اپیدرمال انسانی

سال انتشار: 1393
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 608

متن کامل این مقاله منتشر نشده است و فقط به صورت چکیده یا چکیده مبسوط در پایگاه موجود می باشد.
توضیح: معمولا کلیه مقالاتی که کمتر از ۵ صفحه باشند در پایگاه سیویلیکا اصل مقاله (فول تکست) محسوب نمی شوند و فقط کاربران عضو بدون کسر اعتبار می توانند فایل آنها را دریافت نمایند.

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

CIGS13_0561

تاریخ نمایه سازی: 7 بهمن 1393

چکیده مقاله:

مقدمه و هدف: استفاده از پروتئینهای شبیه به الاستینELPتخلیص پروتئین با عملکرد مناسب بدون نیاز به ستون های کروماتوگرافی را فراهم می آورد. در راستای کاهش هزینه و تسهیل تخلیص پروتئین های نوترکیب که درصد بالایی از هزینه تولید را در بر می گیرد، دراین طرح با طراحی سازه ای با استفاده از خواص پروتئین های شبیه به الاستین و همچنین قرار دادن پروتئینInteinبا خاصیت اتوکاتالیتیک ما بین فاکتور رشد اپیدرمال انسانی وELPنیاز به پروتئازهای لازم در فرایند جدا سازی پروتئین نوترکیب ازELPمرتفع میگردد دراین مطالعه ابتداژن Mxe GyrA intein از حاملPTXB1 به وسیله PCRتکثیرودروکتورpUC57-hEGFکلون شد سپس توالیهای تکراری 8xELPابتدا در وکتورpUC57و سپس در وکتورpUC57-intein-hEGFدر بالادستIntein-hEGF کلون گردید. سازه ی8xELP-Intein-hEGFدر وکتور بیانیpET15bکلون و در باکتریE. coliبیان شد. با فراهم کردن شرایط فعال سازی اینتئین یعنی افزودنDTTوانکوباسیون در4درجه پس ازگذشت زمان مناسب EGFازIntein-ELPجدا گردید.با قرار دادن محلول در دمای اتاق، افزودن سولفات آمونیوم و سانتریفیوژELP-Inteinرسوب کرده وhEGFدر سوپرناتانت باقی ماند.نتیجه: مراحل طراحی و ساخت سازه ی ژنیpUC57-8xELP-Intein-hEGFبا موفقیت انجام شد. صحت توالی ژنی8xELP-Intein-hEGFبا روش تعیین توالی و بیان این سازه درE. coliبا روش وسترن بلات تأیید گردید. استفاده از سازه ی،ELP-Inteinخالص سازی پروتئین های نوترکیب را تنها با مراحلی متشکل از دما، نمک و سانتریفیوژ، بدون نیاز به آنزیم های پروتئولیتیک فراهم می آورد، دستیابی به این فناوری، تولید و تخلیص پروتئین های نوترکیب را با حداقل هزینه و امکانات فراهم می آورد

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد اپیدرمال انسانی ، تخلیص ، پروتئین های شبیه به الاستین ، اینتئین

نویسندگان

نوگل عمومی

گروه زیست شناسی واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی تهران، ایران

محمدعلی شکرگذار

بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

زهرا نورمحمدی

گروه زیست شناسی واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی تهران، ایران