تولید پروتئین نوترکیب آمیلوپلولانازcoh00831از باکتریcohnella A01

با توجه به نیاز گستردهی صنایع غذایی به انواع شیرین کنندههای حاصل از هیدرولیز نشاسته همچون شربتهای گلوکز، مالتوز و فروکتوز، استفاده از آنزیمهای هیدرولیز کنندهی نشاسته اهمیت ویژهای پیداکرده است. آنزیم آمیلوپلولاناز ( 3.2.1.41EC یکی از اعضای خانوادهی آلفاآمیلازهاست که، قادر به هیدرولیز پیوندهایα-(1→ و ( 6 α-(1→4 در نشاسته، پلولان و دکسترین میباشد. استخراج DNAژنومی ازباکتری کوهنلا 01Aاستخراج شد و قطعهی ژنی به طولbp1998 جدا شده و در وکتورpGEM-Tکلون گردید. سپس قطعهی مورد نظرتوسط هضم آنزیمی از وکتورpGEM-Tخارج و در وکتورpET28aهمسانهسازی گردید. در هر دو مرحله از کلونینگ جهت اطمینان ازانجام لیگاسیون تعیین توالی نیز صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب با القاءIPTG0/1 مولار) در محیط رشد باکتریBL21 (DE3 حاوی ژن کلون شده، دمای 22 درجه سانتیگراد به مدت 6 ساعت صورت گرفت. مشاهدهی باند حاصل از تولید پروتئین در~66 KDaتاییدی صحت فعالیت پروموتر میباشد

کلیدواژه ها:

آمیلوپلولاناز ، پروتئین نوترکیب ، پلولان