تولید با میزان بالای پروتئین های نوترکیب با روش بیان موقتی در سلول معلقExpi293F

امروزه تولید و بدست آوردن پروتئین های نوترکیب بویژه آنتی بادی های مونوکلونال اساسی ترین و پرچالش ترین مرحله در فرایندکشف دارو می باشد. روش بیان موقتی یک روش سریع در تولید به میزان میلی گرم تا گرم پروتئین های نوترکیب در سلول های معلق بویژه سلول هایCHO و HEK 293 می باشد. با بیان موقتی می توان در مقیاس نیمه صنعتی جهت مطالعات پیش بالینی تولید کرد. داروی فعال کننده پلاسمینوژن بافتی جهت درمان بیماری های ترومبوآمبولی مورد استفاده قرار می گیرد. هدف از این مطالعه، افزایش بیان پروتئین نوترکیبt-PA با استفاده از سیستم بیان موقتی در سلولExpi293Fبه جهت مطالعات پیش بالینی می باشد در حجم1mlسلول به تعداد DNA ، 2.5 × 106 cells/mlوکتوری 1μg و ریجنت 293 ExpiFectamine جهت انجام انتقالDNAبه سلول (ترانسفکشن) مورد نیاز است. میزان ترانسفکشن طی 24و 48 و 72 ساعت با دستگاه فلوسایتومتری بررسی شد. محیط رویی حاصل از کشت جهت بررسی بیان پروتئین با روش الیزا آنالیز شد. به منظور تایید پروتئین،t-PA وسترن بلات انجام شد. در نهایت تخلیص با روش افینیتی کروماتوگرافی انجام شد.بعد از 24و48 و 72 ساعت میزان ترانسفکشن به ترتیب 42%و61 % و 86 % بود. آنالیز بیان پروتئین در روزهای 3و5و6و7و9نشان داد بیشترین بیان پروتئین روز پنجم بود. بعد از تخلیص با افینیتی کروماتوگرافی، بیان پروتئین تقریبا2mg/L بودبنابراین، بیان موقتی یک روش مهم در گسترش تولیدات دارویی و نیز افزایش میزان تولید پروتئین های نوترکیب جهت انجام مطالعات بالینی و پیش بالینی می باشد

کلیدواژه ها:

بیان موقتی ژنTGE ، سلولExpi293F ، فعال کننده پلاسمینوژن بافتی t-PA ، تولید