خاموش سازی ژن فیتوئن دساچورزا با استفاده از هتروژن pds آرابیوپسیس با استفاده از روش VIGS

ا VIGS روشی است که در آن از یک مکانیسم دفاعی ضد ویروس برای خاموش سازی ژن های مورد نظر استفاده می شود به منظور خاموش سازی یک ژن خاص ترادفی از آن را در وکتورهای ویروسی که برای VIGS استفاده می شوند همسانه سازی می کنند گیاهان با روش خاموش سازی پس ترجمه ای (PTGS) اولین خط دفاع ضد ویروسی خود جهت مقابله با تکثیر ویروس را به کار گرفته و بدین وسیله یک مکانیسم تخریب mRNA را برای خاموش نمودن ترادف های ویروسی و ترادف های الحاقی به وکتور ویروسی به کار می گیرند. معمولا برای تست کارایی VIGS، ژن فیتوئن دساچوراز به عنوان ژن مارکر خاموش می شود پس از خاموشی این ژن فیتوئن که به عنوان سوبسترای مورد نیاز برای بیوسنتز کارتنوئیدهاست انباشته می شود و بدین ترتب مسیر ساخت کاروتنوئیدها بلوکه شده و این امر موجب سفید شدگی نوری برگ ها می شود میزان سفید شدگی معیاری از کارایی خاموش سازی خواهد بود. در این پژوهش وکتورهای pTRV2 حامل اگزوژن pds از دو گیاه Nicotiana benthamiana و Arabidopsis thaliana و وکتور کمکی pTRV1 به باکتری E.Coli انتقال یافته و تکثیر شد و بعد از اتخراج وکتورها تایید ژن با استفاده از PCR صورت گرفت. سپس وکتورهای مورد نظر به اگروباکتریوم تومفسینس انتقال یافت و بعد از تایید نهایی توسط غربالگری PCR در نهایت به برگ های گیاهچه 20 روزه تنباکو تزریق شد. بعد از حدود 2 هفه سفید شدگی نوری (photobleaching) مشاهده و مقادیر کلروفیل برگ ها اندازه گیری شد نتایج نشان داد که خاموش سازی با استفاده از ژن هوموژن تنباکو کاراییی بالاتری داشته به طوریکه باعث سفید شدن کامل برگ شد در مقابل انجام VIGS با استفاده از هتروژن گرفته شده از آراببدوپسیس باعث سفیدشدگی ناکامل در برگ تنباکو شد محتوای کلروفیل بین نمونه های خاموش سازی شده نسبت به نمونه های شاهد کاهش معنی داری (0.05>=P) داشت نتایج در کل نشان داد که کارایی خاموش سازی با این روش بستگی زیادی به میزان تشابه توالی وارد شده در وکتور VIGS با ژن همولوگ میزبان دارد.

کلیدواژه ها:

خاموش سازی ژن به روش القایی توسط ویروس (VIGS) ، فیتوئن دساچوراز ، سفید شدگی نوری ، تنباکو ، آرابیدوپسیس