شناسایی اولیه پپتیدهای ضد باکتریایی از بذر گیاه Onobrychis sativa

ظهور و گسترش عفونت های باکتریایی مقاوم به دارو از جمله مهمترین مشکلات بخش بهداشت و درمان در سراسر جهان است گیاهان به عنوان یکی از مهمترین منابع طبیعی از دیرباز برای یافتن ترکیبات ضد باکتریایی جدید مورد توجه بوده اند در سال های اخیر پپتیدهای گیاهی ضد میکروبی هم به عنوان موادی با قابلیت استفاده برای درمان عفونت های باکتریایی در انسان مورد توجه قرار گرفته اند این پپتیدها که از آنها تحت عنوان کلی دفنسین هم یاد شده است از لحاظ ساختار و عملکرد بسیار شبیه به انواع انسانی و باکتریایی هستند در این مطالعه با بررسی بذر ده گیاه مختلف بذر Onobrychis sativa به عنوان منبعی برای چنین پپتیدهایی شناخته شد. در غربالگری از روش Agar over-lay استفاده شد. بدین منظور ابتدا پروتئین های محلول در آب بذر توسط بافر استخراج گردیدند. سپس 50 میکروگرم از محلول پروتئینی بذر هر گیاه بر روی ژل پلی اکریل آمید 15% و حاوی SDS لود شده و الکتروفورز انجام شد. سپس پروتئین های جدا شده بر روی ژل ، در محلول حاوی ایزوپروپانول ، اسید استیک و آب مقطر بر روی ژل تثبیت شده و سپس باقیمانده مواد شیمیایی و SDS به کمک شستشو در آب مقطر استریل حذف شدند. در انتها نحیط کشت مولر هینتون آگار حاوی 0/75% ، آگار و 7^10×5 CFU از باکتری مورد آزمایش بر روی ژل پلی اکریل آمید ریخته شده و گرماگذاری در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 20 ساعت انجام شد در مورد پروتئین های محلول در آب بذر Onobrychis sativa و باکتری های Staphylococcus aureus ATCC 25923 و Enterococcus faecium هاله های عدم رشد در سه تکرار مختلف مشاهده شد که با وجه به موقعیت نسبی هاله های عدم رشد، در مقایسه با ژل رنگ شده با کوماسی بلو، نشان دهنده وجود پپتیدهای ضد میکروبی در پروتئین های استخراج شده از بذر گیاه با روش ذکر شده است روش ارائه شده می تواند به خوبی برای غربالگری اولیه بذر گیاهان از لحاظ وجود چنین پپتیدهایی استفاده شود.

کلیدواژه ها:

عفونت های باکتریایی ، Onobrychis sativa ، پپتیدهای ضد باکتریایی