بررسی میزان شیوع کریپتوسپوریدیوم انسانی در شهر ارومیه و تعیین گونه های انگل با استفاده از آنالیز PCR-RFLP ژن 81s rRNA

کریپتوسپوریدیوم یک پروتوزوئر زئونوز است که به عنوان عامل مهم اسهال آندمیک و اپیدمیک شناخته شده که اغلب کودکان و بیماران دچار نقص سیستم ایمنی بویژه مصرف کننده داروهای سرکوبگر ایمنی سلولار و هومورال را تهدیدمیکند. مطالعه حاضر با هدف بررسی میزان شیوع کریپتوسپوریدیوم و ارتباط آن با برخی از متغیرها و تمایز ایزوله های انسانی بر مبنای قطعه 597bp ژن 85s rRNA ، جهت تعیین گونه های شایع این انگل در ارومیه طراحی و اجرا شد. دراین مطالعه توصیفی مقطعی، طی تیر 49 خرداد 49و 8011 نمونه مدفوع از آزمایشگاههای ارومیه مورد بررسی قرار گرفت. پس ازتغلیظ با روش فرمالین اتیل استات، در ادامه گسترشهای تهیه شده بروش کاینیون اسید فاست رنگ آمیزی شد، جهت - بررسی مولکولی نمونه های مثبت بروشهای گرادیانت منقطع ساکارز و گرادیانت پرکول مورد تخلیص و جداسازی قرار گرفتنددر مرحله بعد DNA ژنومی استخراج و قطعه ژن 85s rRNA جدایه ها با روش Nested-PCR تکثیر گردید، سپس محصول PCR با آنزیم محدود کننده Vsp8 برش داده و تعیین ترداف شد. پردازش اطلاعات با بهره گیری از نرم افزار Excell,v.0189 و v., 84 SPSS انجام پذیرفت. برای تعیین ارتباط بین متغیرها از آزمون )کای اسکوئر χ0 ( با اطمینان 47 ٪ استفاده شد.از نمونه های رنگ آمیزی شده بروش کاینیون اسید فاست 88 نمونه 0/92درصد مثبت تشخیص داده شد، آنالیز داده ها نشان داد که اختلاف معنی داری مابین میزان شیوع انگل در گروههای سنی مختلف، محل سکونت، فصل/ماه ابتلا و ابتلا به نقص سیستم ایمنی با افراد عادی وجود داشت) P<1,18 ( ولی در مورد گروههای جنسی تفاوت معنی داری در میزان شیوع وجود نداشت ) P>1,18 (. همه نمونه های مثبت با روش Nested-PCR تأیید شد. نتایج PCR-RFLP روی ژن 85s rRNA نشان داد که از میان 88 ایزوله مثبت انسانی ، 4 ایزوله دارای ژنوتایپ کریپتوسپوریدیوم پاروم و 0 ایزوله دیگر ژنوتایپ هومنیس بود که بیانگر غالبیت مطلق کریپتوسپوریدیوم پاروم حیوانی در آلودگیهای انسانی بود

کلیدواژه ها:

کریپتوسپوریدیوم پاروم ، کریپتوسپوریدیوم هومنیس ، شناسایی مولکولی ، ژن 85s rRNA ، Nested-PCR ، ارومیه