طراحی و ساختBCGنوترکیب حاوی ژن سیتوزین دآمیناز به منظور ارتقاء کارایی BCGاینتراوزیکال در درمان سرطان مثانه

زمینه و اهداف: سرطان مثانه دومین سرطان شایع دستگاه ادراری تناسلی در جهان است. ایمونوتراپی با - BCG درمان انتخابی این سرطان می باشد. روش دیگر، ژن درمانی سرطان مثانه با سیست م Cytosine Deaminase/5‐ Fluorocytosine ( CD/5‐FC) است. هدف از ساخت شاتل وکتور مایکوباکتریال، انتقال ژن سیتوزین دآمیناز (CD )به BCG با روش الکتروپوریشن بود تا با تبدیل 5-FC به 5‐ Fluorouracil (5‐FU )توسط آنزیم CD سلول های توموری بیشتری نابود شوند . روش بررسی : قطعات ژنی شاتل وکتور مایکوباکتریال شامل، پروموتر hsp 60 توالی سیگنال آلفا آنتی ژن و ژن CD مخمر (Saccharomyces cerevisiae ) پس از تکثیر با PCR و هضم آنزیمی و با استفاده از فناوری های کلونینگ در پلاسمید pBGGT و pVN 2 به ترتیب کلون و ساب کلون شدند. پلاسمید نهائی با روش الکتروپوریشن به داخل BCG هدایت گردید و وجود آن در BCG بررسی شد. یافته ها: نتایج تعیین توالی وکتور نهایی صحت آن را تأیید و وکتور pHARA نامگذاری شد. سلول هائی که pHARA را دریافت کردند پس از 17 روز روی محیط میدل بروک 7 H 10 حاوی غلظت نهائی 20μg/ml کانامایسین ، کلنی تشکیل دادند. نتیجه گیری : BCG نوترکیب فوق علاوه بر فراخوانی موضعی سیستم ایمنی، با تبدیل داروی 5-FC به 5 ‐ FU توسط آنزیم CD می تواند سلولی توموری بیشتری را نابود نماید

کلیدواژه ها:

سرطان مثانه ، ایمونوتراپی ، ژن درمانی ، الکتروپوریشن ، BCG