جدا سازی ژن زیر واحدG آنزیم V-ATPaseاز قارچ Trichophyton rubrum و کلونینگ آن در E.coli

شایعترین عامل کچلی انسان Trichophyton rubrum )T.rubrumدر سراسر دنیا میباشد درمان این بیماری کامل نیست و پس از قطع دارو عود کننده است. اخیراً زیرواحد Gاز آنزیمV-ATPaseبهعنوان هدف برای داروها مورد توجه قرار گرفته. هدف مطالعه کلون کردن ژن کدکننده زیرواحدG آنزیمV-ATPaseقارچ T.rubrumدر باکتریE.coliبهمنظور نگهداری و مطالعه بر روی پروتئین حاصل از آن بود. RNA و DNAاز قارچ درماتوفیتT.rubrumجدا شد، سپس توسطRT-PCR و PCRتکثیریافت و محصولRT-PCRدر پلاسمیدpTG19–Tالحاق شد. پلاسمید نوترکیب با روش شوک حرارتی بهداخل E.coliوارد شد. باکتری کشت داده شد و کلنیهای مشکوک جدا شدند و مجداداً کشت داده شدند .سپسPCR طبق روش قبل انجام شد بهنظر میرسد که این ژن دارای اینترون است. کلنیهای سفید رنگ بهاحتمال زیاد دارای ژن مورد نظرمیباشد. نتایج حاصل ازPCRدر آخرین مرحله نشان دهنده کلون شدن ژن مورد نظر است.

کلیدواژه ها:

کلون کردن ، زیرواحدPCR ، Trichophyton rubrum ، V-ATPase ، G