افتراق سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا به روش PCRبر مبنای ژن ompL1 و طراحی یک کنترل مثبت جهت بهینه سازی این تست تشخیصی

لپتوسپیروزیس شایع ترین بیماری مشترک بین انسان و حیوان درسراسر جهان است تشخیص صحیح و به موقع این بیماری حائزاهمیت می باشد به علت کندرشد بودن لپتوسپیرا وشرایط خاص نگهداری وعدم دسترسی همگان به سوشهای رفرانس استفاده ازیک تست سریع و دقیق مولکولی مانند PCR به همراه یک کنترل مثبت به منظور تایید صحت آن ضروری می باشد ژن ompL1 فقط درلپتوسپیراهای پاتوژن وجود دارد درمیان آنها شدیدا حفظ شده است بنابراین میتوان ازآن درتست های تشخیصی مولکولی مانند PCR استفاده کرد درتست PCR جهت اطمینان ازدستیابی به نتیجه صحیح نیازمند یک کنترل مثبت هستیم هدف این تحقیق بهره گیری ازخصوصیات ژن ompL1 به منظورافتراق سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا ازغیربیماریزا بااستفاده ازPCR و طراحی یک کنترل مثبت جهت بهینه سازی این تست می باشد دراین تحقیق اپنج سروواربیماریزای لپتوسپیرا و یک سرووار غیربیماریزا استفاده گردید باکتریها درمحیط کشت اختصاصی کشت داده شدند و DNA ژنومیک آنها تخلیص گردید پرایمرهای اختصاصی جهت تکثیر ژن ompL1 طراحی و حساسیت و ویژگی آن درPCR بررسی شد جهت تهیه کنترل مثبت بااستفاده ازتکنیک کلونینگ محصول PCR یکی ازسرووارهای پاتوژن به انتخاب خالص سازی شده و دروکتور pJET1.2/blunt الحاق گردید و درباکتری E.coli (Top10 کلون گردید تخلیص DNA نوترکیب توسط کیت انجام گرفت پلاسمید حاوی ژن موردنظر تعیین ترادف شد

کلیدواژه ها:

لپتوسپیرااینتروگانس ، ompL1 ، PCR ، کنترل مثبت