مهار موقت بیان ژن VEGFR2 با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت

مقدمه: امروزه استفاده از siRNA برای خاموش سازی بیان ژن ها در حال گسترش است. از جمله اهداف این تکنولوژی؛ جلوگیری از بیان عامل رشد اندوتلیال عروقی است. مطالعه حاضر به منظور جلوگیری از بیان گیرنده تیپ II این عامل VEGFR-2: Vascular Endothelial Growth Factor Receptor II با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است. مواد و روش ها: ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی های siRNA اختصاصی علیه آن طراحی؛ تایید اختصاصیت و ساخته شد. از طرف دیگر cDNA سلول HUVEC سنتز و با کمک پرایمر اختصاصی و PCR به میزان موردنیاز تکثیر شد و سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1 درج و تأیید شد. پلاسمید ناقل حاصله با استفاده از لیپوفکتامین به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود انتقال داده شد. میزان بیان GFP در وکتور اولیه و وکتور تراریخت شده در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP و RT-PCR بررسی شد. نتایج: نتایج حاصل از دو siRNA به کار رفته بیانگر کاهش بیان ژن به ترتیب 56 % و 62 % در مقایسه با گروه کنترل بود ( p<0/05) .نتیجه گیری: siRNA اختصاصی طراحی شده علیه VEGFR-2 با استفاده از لیپوفکتامین به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان گیرنده به طور معنی دار جلوگیری نمود. در واقع این siRNA با قطع مسیر پیام رسانی رگزایی، می تواند از پیدایش عروق جدید جلوگیری نماید بنابراین احتمالاً می تواند به عنوان یک عامل مناسب درمانی جدید در جلوگیری و یا کاهش رگزایی مطرح باشد.

کلیدواژه ها:

اVEGFR-2 ، و siRNA ، نئوواسکولاریزاسیون ، HUVEC و .RT-PCR