شناسایی مولکولی گون ههای تیلریا و ناقلین آن در گاوهای شهرستان یزد با روش Semi-nested PCR

زمینه مطالعه: تیلریوز یکی از بیماریهای تک یاخت های خونی در گاو بوده که سبب مرگ و میر بالا م یشود. تاکنون مطالعات میکروسکوپی زیادی درباره شناسایی گون ههای آلوده کننده تیلریا در گاو و کن ههای ناقل صورت گرفته که در مقایسه با رو شهای مولکولی از حساسیت و ویژگیکم یبرخوردارند. هدف: دراین مطالعه سعی شدگون ههای تیلریاوناقلین آن درگاوهای شهرستان یزدباروش Semi-nested PCR موردشناساییقرارگیرند. مواد و روش کار: طی ماههای خرداد تا شهریور سال 1391 ، تعداد 100 نمونه خون EDTA به همراه گستر شهای نازک خون ازگاوهای شیری نژاد هلشتاین مشکوک به تیلزیوز بدون سابقه واکسیناسیون بر علیه بیماری تهیه گردید. همزمان با بازرسی بدن گاوها تعداد 249 عدد کنه جمع آوری شدندگسترش تهیه شده با گیمسا رنگ آمیزی شدندو DNA از نمون ههای خون با استفاده از کیت تجاری استخراجگردیدند. کن هها همچنین با استفاده از کلی دهای تشخیص شناسایی و بر اساس جنس و گونه کنه به 50 مجموعه 5 کن های تقسیم شدند و بااستفادهاز لوپ و وسایل حشره شناسی غدد بزاقی آنها جدا سازی و DNA آنها نیز استخراج گردید. نمون ههای DNA استخراج شده با آن- Semi nested PCR بر روی ژن 18S rRNA ، مورد آزمایش قرار گرفتند. جهت تشخیص تیلریا لستوکاردی و تفریق آن از تیلریا آنولاتا در نمون ههای کنه از روش PCR-RFLP استفاه شد. نتایج: در بررسی اولیه انجام شده با میکروسکوپ نوری، در 4 گسترش خونی ) 4%( اشکال حلقوی انگلمشاهده گردید. همچنین همه کن ههای جمع آوری شده هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم تشخیص داده شدند. نتایج به دست آمده با روش - Semi nested PCR ، نشان دهنده آلودگی 11 نمونه خون ) 11 %( و سه مجموعه غدد بزاقی کنه به تک یاخته تیلریا آنولاتا بودند. هیچ یک از نمون هها آلوده به تیلریا اورینتالیس نبودند. مطالعات تکمیلی با PCR-RFLP با استفاده از آنزیم MspI نیز نشان داد که نمون ههای کن هها همگی از نظر آلودگی به تیلریا لستوکاردی منفی م یباشند. نتیجه گیری نهایی: بر پایه نتایج بدست آمده تیلریا آنولاتا و کنه هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم عامل و ناقل مهم تیلریوز گرمسیری در شهرستان یزد م یباشند..

کلیدواژه ها:

تیلریا ، گاو ، Semi-nested PC