انتقال ژن MiAMP1 به کلزا (Brassica napus L.) از طریق روش اگروباکتریوم با هدف افزایش مقاومت به بیماری اسکلروتینا (Sclerotinia sclerotiorum)

به منظور انتقال ژن MiAMP1 به عنوان منبعی جهت افزایش مقاومت به بیماری اسکلروتینا در کلزا از روش اگروباکتریوم استفاده شد . ریزنمونه های کوتیلدون رقم کوانتوم با سویه AGL0 اگروباکتریوم تومفاسینس که حاوی ناقل طراحی شده pCAMBIA-MiAMP1 دارای ناحیه کدکننده کامل ژن MiAMP1 همراه با ژن گزارشگر بتا -گلوکورونیداز (GUSPlus)، ژن مقاومت به کانامایسین (kan) و ژن مقاومت به هیگرومایسین (hpt) به عنوان نشانگر قابل انتخاب در گیاه می باشد، تراریزش گردیدند. ریزنمونه ها پس از هم کشتی با اگروباکتریوم به مدت یک تا دو روز تا زمان ظهور نشانه ها یی از باکتری در حاشیه ریزنمونه در نور ضعیف و دمای 22 درجه سانتی گراد بر روی محیط کشت کالوس زایی MS ، بدون آنتی بیوتیک ، قرار گرفتند و سپس به محیط باززایی حاوی 500mg/l سفوتاکسیم و 2mg/l هیگرومایسین انتقال یافتند . ریزنمونه ها هر دو هفته یک بار به محیط کشت های باززایی تازه به تدریج با افزایش غلظت هیگرومایسین تا 10mg/l و کاهش غلظت سفوتاکسیم تا 100mg/l انتقال یافتند . بیان ژن Gus با استفاده از محلول رنگ آمیزی X-Gluc در ریزنمونه های باززایی شده بررسی شد. نقاط آبی رنگ مشاهده شده بیانگر تظاهر موقت ژن مورد نظر می باشد. همچنین آنالیز PCR ریزنمونه ها با آغازگرهای اختصاصی ژن MiAMP1 نشان دهنده وجود حداقل یک نسخه از این ژن در ژنوم گیاهان بود . ریزنمونه های انتخابی به محیط کشت ریشه زایی و سپس به گلخانه انتقال یافتند . گیاهان حاصله به طور مجدد مورد تجزیه و تحلیل PCR و رنگ آمیزی X-Gluc قرار گرفتند و وجود ژن MiAMP1 در ژنوم گیاهان تراریخته احتمالی اثبات شد.

کلیدواژه ها:

انتقال ژن ، اگروباکتریوم ، کلزا ، اسکلروتینا ، PCR ، MiAMP1 و تراریخته