نقش افزودنیهای مختلف در Refolding پروتئین نوترکیب GST-NTP

م Inclusion body (IBs) ها تجمعات پروتئینی هشتند که در اثر بیان بالای ژنهای پلاسمیدی در باکتریهای نوترکیب ایجحاد می شوند. از آنجا که تولید پروتئینهای نوترکیب از نشر اقتصادی مهم است، یافتن روشهایی مناسب Refolding اهمیت فراوان دارد. برای تهیه پروتئین فعال ib ها ابتدا آنها را در ماده ای واسرشته حل کرده، سپس با خارج کردن تدریجی ماده واسرشته کننده پروتئین به شکل طبیعی خود باز می گردد. از جمله روش های متداول، رقیق سازی در حضور افزودنی ها می باشد که در این روش از افزودنی ها - معمولاً مولکولی با وزن کم- در بافر رقیق سازی استفاده می شود. ما در آزمایش های خود از افزودنی ها به همراه تغییرات pH برای انجام فرایند Refolding پروتئین نوترکیب GST- NTP استفاده نمودیم. پس از تولید و جداسازی IB از باکتریهای نوترکیب آنها در اوره 8 مولار حل شدند و در حضور افزودنی های ژنین، پرولین، گلیسین (هر یک 500mM) و سوربیتول، سوکرز، گلیسرول، گلوکز، ترالوز، پلی اتیلن گلیکول 3400 (20 درصد از هر کدام)، در PBS رقیق سازی انجام شد. کدورت سنجی، تعیین غلظت پروتئین محلول، فعالیت آنزیمی GST و فعالیت ویژه اندازه گیری شد. همچنین Refolding در pH های مختلف در حضور آرژنین انجام شد. آزمایشها نشان می دهد که آرژنین حلالیت پروتئین Refold را افزایش می دهد اما بیشترین میزان فعالیت ویژه در حضور پلی اتیلن گلیکول 3400 به دست آمد. همچنین مشخص شد، هر چند افزایش pH در حضور آرژنین باعث افزایش فعالیت ویژه و کاهش کدورت می گردد اما در هر حالت وجود آرژنین به عنوان یک افزودنی مؤثر است. مطالعات نشان نی دهد پلی اتیلن پلیکول به حد واسط های اولیه Folding متصل شده، تشکیل تجمعات را مهار می کند. مکانیسم عمل آرژنین در Refolding به خوبی مشخص نیست اما احتمالاً حلالیت حد واسط های اولیه Folding را افزایش می دهد.

کلیدواژه ها:

Inclusion body ، Refolding پروتئین ، افزودنیها