انتقال ژن gus به نخود (Cicer arietinum) با استفاده از اگروباکتریوم تومه فاسینس

به منظور بررسی امکان انتقال ژن به گیاه نخود( Cicer arietinum )، دو جداکشت محور جنینی سربریده و مریستم انتهایی از رقم بیونیج به وسیله اگروباکتریوم تومه فاسینس سویه LBA4404 حامل پلاسمید Pbi121 آلوده شدند. این پلاسمید حاوی ژنهای بتاگلوکورونیداز (gus) با پیشبر ویروس موزائیک گل کلم CaMV35S و نئومایسین فسفوترانسفراز (nptII) با پیشبر Nos می باشد. در این تحقیق دو نوع سوسپانسیون (سوسپانسیون I : رسوب باکتریهای معلق در محیط MS حاوی ترکیبات سدیم تیوسولفات، استو سرینگون و ال - سیستئین و سوسپانسیون II: باکتری کشت داده شده در محیط LB حاوی 40 میلی گرم استوسرینگون) جهت آلوده سازی و سه دوره زمانی 48، 72، 120 یاعته هم کشتی، مورد بررسی قرار گرفتند. پس از آن جداکشتها روی محیط باززایی ( جداکشتهای محور جنینی بر روی محیط MS حاوی 1/5 میلی گرم در لیتر BAP 0/1 میلی گرم در لیتر IAA و 50 میلی گرم در لیتر کانامایسین و جداکشتهای مریستم انتهایی بر روی محیط MS حاوی 0/5 میلی گرم در لیتر BAP و 0/1 میلی گرم در لیتر IAA و 50 میلی گرم در لیتر مانامایسین) قرار گرفتند. آزمون هیستوشیمیایی بیان ژن gus با استفاده از برگچه گیاهچه های باززا شده در محیط انتخابی انجام شد . براساس نتایج این آزمون برگچه های 5 شاخساره بیان ژن gus را به صورت تظاهر رنگ آبی نشان دادند. نتایج حاصل از انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز نشان داد که از بین ۵ شاخساره که آزمون بیان ژن gus در آنها مثبت بوده که 1 شاخساره از آلوده سازی با سوسپانسیون I و 4 شاخساره از آلوده سازی با سوسپانسیون II حاصل شدند. در ضمن 4 شاخساره متعلق به دوره هم کشتی 72 ساعته و 1 شاخساره مربوط به دوره هم کشتی 120 ساعته بوده است. بر اساس نتایج به دست آمده بهترین درصد تراریزش معادل 1 درصد می باشد که متعلق به تیمار 72 ساعت هم کشتی، سوسپانسیون II و جداکشت محور جنینی سر بریده بوده است.

کلیدواژه ها:

نخود ، انتقال ژن ، اگروباکتریوم