ردیابی، کلون و تعیین توالی بخشی از ژن پروتئین پوششی جدایه‌های ویروس برگ بادبزنی مو از شمال‌غرب کشور و تفکیک آنها

بیماری برگ بادبزنی مو ,(Grapevine fanleaf nepovirus, GFLV) انتشار جهانی داشته و در تاکستانهای ایران نیز شیوع دارد. این ویروس , یکی از عوامل محدود کننده کشت درختچه های مو در جهان می باشد. ردیابی ویروس GFL گامی مؤثر در جهت کنترل این ویروس و خسارت ناشی از آن است. این ویروس, راندمان محصول را ممکن است حتی بیشتر از 80% کاهش دهد و باعث پایین آمدن کیفیت محصول و عمر باردهی در تاکستان ها شود. در پژوهش حاضر به منظور ردیابی این ویروس از تاکستانهای آذربایجانغربی و آذربایجانشرقی طی بهار و تابستان 1382 و 1383 تعداد 221 نمونه گیاهی از تاکهای مشکوک به آلودگی با نمونه برداری شدند. آرتی-پی سی آر (RT-PCR) با آغازگرهای S2515 و A3300 منجر به تکثیر قطعه دی ان ای DNA مورد انتظار به طول حدود 810bp از ژن پروتئین پوششی GFLV از 12 نمونه آلوده به این ویروس شد. این قطعات به پلاسمید pGEM-T متصل و در باکتری E. coli DH5α آلون شدند. باکتریهای ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب بر روی محیط کشت حاوی آمپی سیلین IPTG و X-Gal انتخاب و غربال شده و پلاسمید حاوی قطعات PCR از باکتری های ترانسفورم شده استخراج گردیدند. پلاسمیدهای استخراج شده با آنزیم EcoR1 که جایگاه آن در دو طرف آویزه های T پلاسمید pGEM-T قرار دارد برش داده شدند. در برش با آنزیم EcoR1 پروفیل های متفاوتی در بین جدایه ها (تولید پی سی آر) به دست آمد که نشانگر وجود تغییرات ژنتیکی در بین آنها بود. به منظور انجام مقایسات دقیق تر بین ترادف نوکلئوتیدی این قسمت از ژن پروتئین پوششی جدایه های مختلف GFLV و مقایسه این جدایه ها با سایر جدایه ها و نژادهای این ویروس از مناطق مختلف جهان, تعیین توالی نوکلئوتیدی انجام گرفت. تعداد ١٢ توالی نوکلئوتیدی, هر کدام به اندازه 7600 نوکلئوتید (پس از حذف توالی های مربوط به آغازگرهای S2515 و A3300) به پایگاه اطلاعاتی GenBank واگذار شدند.

کلیدواژه ها:

بیماری برگ بادبزنی مو ، آرتی- پی سی آر ، پروتئین پوششی ، تعیین توالی نوکلئوتیدی