کلونینگ، بیان و تخلیص قطعات نوترکیب پروتئین Core+1 ویروس HCV با هدف تعیین ویژگیهای آنها

مقدمه وهدف: ژنوم ویروس هپاتیت C دارای یک قالب قرائت طویل برای پلی پروتئینی است که به 10 پروتئین جداگانه بریده می شود. اخیرا پروتئین جدیدی بنام (Core+1)ARFP/F شناسائی شده که بیان آن ناشی از یک جابجایی ریبوزومی درسکانس کد کننده پروتئین کپسید می باشد. اگرچه ویژگیهای بیولوژیک این پروتئین جدید هنوز ناشناخته است، بنظر می رسد نقش مهمی را در سیکل زندگی و بیماریزایی ویروس بر عهده دارد، در نتیجه مطالعه برهمکنش احتمالی آن باپروتئین های داخل سلولی، مشابه آنچه در مورد پروتئین کپسید ویروس گزارش شده است، حائز اهمیت می باشد. مطالعه حاضر با هدف تولید اولیه دو قطعه نوترکیب از پروتئین ARFP/F بمنظور ارزیابی آتی آنها طراحی شده است.روش: بر اساس آنالیزهای کامپیوتری ویافتن اپی توپهای احتمالی قطعات آمینو اسیدی 161- 86 و 143 - 43انتخاب شده،سکانسهای نوکلئوتیدی آنها توسط PCR تکثیر شده و در وکتور pET24a کلون شدند. آنالیز آنزیمی و تعیین توالی صحت مراحل کلونینگ را نشان داد. بیان پروتئین در حضور IPTG در (DE3)E.coli BL21 القاء شده، پروتئینها بوسیله SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شدند و با ستون Ni-NTA در شرایط تقلیب تخلیص شدند. با دیالیز در گرادیان کاهشی اوره، بازارایی آنها به فرم طبیعی صورت خواهد گرفت. نتیجه: پلاسمیدهای ساخته شده قطعات انتخابی Core+1 را با موفقیت در اندازه های مورد انتظار ( 11 و 14 کیلودالتون) بیان کردند. این پروتئینهای نوترکیب توسط آنتی بادی ضد His-tag با روش وسترن بلات تائید شده و بروش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص شدند. پس از بازارائی برهم کنش احتمالی آنها با پروتئین های داخل سلولی بررسی خواهد شد.

کلیدواژه ها:

Ni-NTA ، Core+1 ، C هپاتیت