بیان تخلیص و تعیین مشخصات آنزیم نوترکیب لوسین دهیدروژناز از POS-91 Bacillus cereus

سال انتشار: 1392
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 565

فایل این مقاله در 5 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

NBCI08_0443

تاریخ نمایه سازی: 29 شهریور 1394

چکیده مقاله:

زمینه و هدف: لوسین دهیدروژناز (; EC 1.4.1.9 Leucine Dehydrogenase) عضوی از خانواده آنزیم های آمینو اسید دهیدروژناز است که بواسطه کاربردهایش درتولید آمینو اسیدهای واجد زنجیره شاخه دار، تولید ترکیبات حدواسط دارویی و نیز سنجش لوسین در نمونه های خونی با هدف غربالگری بیماری بوی ادرار شربت افرا مورد توجه خاصی قرار گرفته است. دراین تحقیق، آنزیم لوسین دهیدروژناز شناسایی شده از سوش بومی Bacillus cereus مورد مطالعه قرار خواهد گرفت. روش ها: ابتدا ژن آنزیم مربوطه جداشده و سپس باکمک روش های مهندسی ژنتیک فرم نوترکیب آن تولید شد. بیان آنزیم نوترکیب توسط روش های سنجش فعالیت بیولوژیک و SDS- PAGE تایید شده و با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی تخلیص گردید. خصوصیات کینتیکی و فیزیک و شیمیایی آنزیم تولید شده، نظیر پارامترهای کینتیکی ، دما و PH بهینه ی فعالیت و پایداری آنزیم،pH ایزوالکتریک ، ترکیب آمینو اسیدی و جرم مولکولی نیز مطالعه شدند. نتایج: بهترین شرایط برای تولید لوسین دهیدروژناز نوترکیب باIPTG 0/5 میلی مولار دردمای 23 درجه سانتی گراد و زمان القاء 5 ساعت به دست آمد و فعالیت آنزیم تولید شده، 2100U/ML محاسبه شد. ترادف نوکلئوتیدی آنزیم، پروتئینی به طول 398 آمینو اسید را کد می نمود و وزن مولکولی هر زیر واحد توسط الکتروفورزSDS-PAGE، ا43 کیلو دالتون تخمین زده شد.در مجموع،ژن آنزیم لوسین دهیدروژناز از باکتری B. cereus POS-91 جداسازی و کلون شد و فرم نو ترکیب آن در E. coli بیان گردید. تحقیق انجام شده اولین گزارش از تولید آنزیم نوترکیب لوسین دهیدروژناز جداسازی شده از سوش مذکور می باشد.

نویسندگان

حمید شهباز محمدی

گروه بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

اسکندر امیدی نیا

گروه بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • هسنمین همابس ببو نکنولوزی جم‌هوری اسلامی ابران _ چهارمین همابس ...
  • Seah, S.Y.K. (2007) Amino acid dehydro genases _ Industrial enzymes, ...
  • Nagata, S. (1995) Gene cloning, purification, and characterizati _ of ...
  • Katoh, R., Nagata, S., Misoni, H. (2003) Cloning and sequencing ...
  • Pucket, R. L., et al. (2010) Maple syrup urine disease: ...
  • Quenral, S., et al. (2010) Incidence of maple syrup urine ...
  • نمایش کامل مراجع