شناسایی مولکولی سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرای جدا شده از فیلد در ایران بر اساس ژن ligB به روش PCR

لپتوسپیروز،شایع ترین بیماری مشترک بین انسان و حیوان در سراسر جهان است . علائم بالینی این عفونت در 90 درصد موارد به صورت غیر اختصاصی و مشابه انفولانزا بوده و در صورت عدم تشخیص و درمان به موقع، بیماری وارد فاز حاد شده و صدمات جدی و طولانی مدت ایجاد میکند بنابراین تشخیص صحیح و به موقع این بیماری حائز اهمیت می باشد. به علت کند رشد بودن لپتوسپیرا و شرایط خاص نگه داری و عدم دسترسی همگان به سوش های رفرانس استفاده از یک تست سریع و دقیق مولکولی مانند PCR ضروری می باشد. ژن ligB فقط در لپتوسپیراهای پاتوژنوجود دارد و در میان آن ها حفظ شده می باشد بنابراین می توان از آن در تست های تشخیصی مولکولی مانند PCR استفاده کرد. هدف این تحقیق بهره گیری از خصوصیات ژن ligB به منظور شناسایی مولکولی در افتراق سرووارهای بیماریزایلپتوسپیرا از غیر بیماریزا با استفاده از PCR می باشد . روش ها:ابتدا چهار سرووار بیماری زای جدا شده از فیلد(ادرار گاو) که در آزمایشگاه رفرانس لپتوسپیرا- بخشمیکروب شناسی موسسه رازی کرج موجود است، در محیط نیمه جامد EMJH کشت داده شد. یک هفته تا 10 روز بعد از کشت،رسوب گیری انجام گردید و بعد به روش فنل –کلروفرم تخلیص DNA صورت گرفت. سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده برای ژن ligB ، روی سرووارهای بیماری زا و یک سرووار غیر بیماری زا تست PCR انجام شد و نتایج بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. قطعات تکثیری زیر دستگاه ترانس لومیناتور مشاهده شد و عکس نهایی توسط دستگاه مستند ساز ژل گرفته شد. یافته ها:محصول PCR به دست آمده یک قطعه 1041 جفت بازی را نشان داد که نشان دهنده تکثیر ژن ligB بود که سپس توسط الکتروفورز روی ژل آگارز 1% و با استفاده از سایز مارکر مورد تایید قرار گرفت.با اتکا به داده های PCR مشخص شد که این ژن فقط در سرووارهای بیماری زا حضور داشته در حالی که در سرووار غیر بیماری زای بایفلکسا وجود نداشت. بحث و نتیجه گیری : تست آگلوتیناسیون میکروسکوپی( MAT ) رایج ترین تست تشخیصی لپتوسپیروز می باشد ولی به دلیل نیاز به کشت لپتوسپیرا و کندرشد بودن این باکتری و همن طور احتمال ایجاد آلودگی با مشکلاتی مواجه است. PCR یک روش سریع ، حساس و اختصاصی برای تشخیص عفونت های لپتوسپیرایی خصوصا در اوایل بیماری می باشد. بنابراین انجام آن بر مبنای ژن بیماری زای ligB برای شناسایی لپتوسپیراهای پاتوژن در نمونه هایکلینیکی بسیار مفید می باشد.

کلیدواژه ها:

ا PCR ، لپتوسپیرای بیماری زا ، لپتوسپیرای غیر بیماری زا ، ژن ligB