بیان و تخلیص الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا ( PAE ) یک متالوپروتئاز خنثی، محتوی یک اتم روی ( Zn2 +) می باشد و به عنوان یک پری پرو آنزیم سنتز می شود پروپپتید برای فولدینگ الاستاز ضروری می باشد و فولدینگ برای پردازش بیشترپروآنزیم یعنی autoproteolytic نیاز می باشد باقی مانده های پروپپتیدی به طور غیر کووالان با الاستاز بالغ تجمع می یابند وفعالیت پروتئولیتیکی آنزیم را مهار می کنند. پیوند دی سولفیدی بین Cys270 ،Cys279 فرایند autoproteolytic که طی پردازش رخ می دهد ضروری است و پیوند دی سولفیدی دوم بین Cys30،Cys57 خیلی به کندی و بعد از پردازش پروآنزیم تشکیل می شود و این پیوند دی سولفیدی برای فعالیت پروتئولیتیکی و پایداری ضروری است. روش ها: ژن مربوطه در یک وکتور بیانی مناسب ( pET-21a + ) جاگذاری و سپس درون میزبان مناسب (BL21) ترانسفورم شد. بیان این ژن با القا توسط IPTG صورت گرفت. تخلیص محصول بیانی به روش کروماتوگرافی تعویض یونی با استفاده از ستون Q-Sepharose انجام گرفت. نتیجه گیری: قابل ذکر است که درتمامی تحقیقات و مطالعات انجام شده بر روی PAE از انواع مختلفی از حامل ها جهت بیان الاستاز استفاده شده است، اما تاکنون گزارشی از بیان الاستاز در وکتور pET در دسترس نمی باشد. با توجهبه اینکه سیستم pET قویترین سیستم توسعه یافته جهت کلونینگ و بیان پروتئین های نوترکیب در E. coli می باشد ژن الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه PTCC 1430 در باکتری E. coli بوسیله سیستم pET کلون شده و با راندمان بسیار بالا در E. coli بیان و خالص گردید.

کلیدواژه ها:

الاستاز ، سودوموناس آئروجینوزا ، Pet