تشخیص سریع ویروس آنفلوانزای انسانی به روش PCR در 25 دقیقه

ویروس آنفلوآنزا نوعی RNA ویروس و عامل ایجاد عفونتهای تنفسی در انسان است. همه گیری جهانی آنفولانزا بارها به وقوع پیوسته و علاوه بر تحمیل خسارات مالی فراوان ، افراد زیادی را به کام مرگ کشیده است . عفونت آنسفالوپاتی آنفلوآنزا در صورت درمان نشدن طی مدت 1 تا 2 روز باعث مرگ نوزادان خواهد شد. اکثر داروهای موجود جهت مقابله با این ویروس وقتی موثر هستند که در فاصله 24 ساعت پس از اولین تب تجویز شوند. بدلیل ماهیت مسری ویروس های آنفولانزا نوع A این بیماری می تواند به سرعت منتشر شود. از این‌رو شناسایی ویروس در همان مراحل اولیه برای کنترل بیماری از اهمیت بسزایی برخوردار است. بدین منظور روش های مولکولی متعددی توسعه یافته اند که بسیاری از این روشها به PCR بعنوان روش تکثیر ژنوم وابسته اند. با مقایسه زمانهای مربوط به استخراج RNA، تولید cDNA و PCR مشاهده می شود، تا بیش از 75% کل زمان فرآیند تشخیص صرف چرخهPCR شده است. این تحقیق بمنظور توسعه نوعی روش PCR بهینه سازی شده برای به حداقل رساندن زمان تکثیر انجام شد. با استفاده از کیت one-step طی مدت زمان 40 دقیقه RNAی ویروس استخراج و با استفاده از آنزیم ترانس‌کریپتاز معکوس به cDNA تبدیل شد. پس از آن با استفاده از پرایمرهای طراحی شده برای ژن پروتئین M، و به‌ کارگیری آنزیم Z-DNA پلیمراز به روش سریع واکنش زنجیره ای پلیمراز انجام شد که 25دقیقه به طول می‌انجامد. استفاده از پروب مولکولی SyberGold برای آشکارسازی آمپلیکون های 240 جفت بازی از cDNA ویروس موجبات حساسیتی بالا برای تشخیص مولکولی این ویروس فراهم آورد. در این تحقیق سرعت تکثیر cDNA در مقایسه با واکنش زنجیره ای پلیمراز که با آنزیم Taq DNA پلیمراز انجام می شود، تا بیش از پنج برابر افزایش یافت. به نظر می‌رسد استفاده از این روش می تواند گامی موثر در توسعه روش‌های تشخیص مولکولی برای شناسائی زودهنگام ویروس آنفولانزای انسانی باشد.

کلیدواژه ها:

ویروس آنفولانزای انسانی ، PCR سریع ، cDNA ژن M ، SyberGold