فیوژن ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و ژن توکسین آلفا کلستریدیوم سپتیکوم و کلونینگ آن در E.coli

کلستریدیوم پرفرینجنز یکی ازمهمترین پاتوژن های انسان و دام بوده و یک باکتری بی هوازی، اسپورزا ومقاوم به گرماست که به پنج تیپ A-E طبقه بندی می شود و چهار توکسین اصلی و بیش از دوازده توکسین فرعی تولید می کند. اپسیلون از جمله توکسین های اصلی این باکتری بوده و بعد از نوروتوکسین های بوتولینوم وتتانوس سومین توکسین قوی کلستریدیایی است. کلستریدیوم سپتیکوم نیز از جمله باکتری های گرم مثبت، اسپورزا و بی هوازی اجباری است که چهارتوکسین به نام های آلفا، بتا، گاما وتتا را تولید می کند. توکسین آلفا مهمترین عامل کشندگی کلستریدیوم سپتیکوم می باشد. هدف این مطالعه تولید یک ساختار جدید شامل ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و ژن توکسین آلفا کلستریدیوم سپتیکوم می باشد. مطالعات بیوانفورماتیک جهت طراحی فیوژن ژن اپسیلون- آلفا انجام شد تا مشخص گردد که آیا این ساختار می تواند در سلول میزبان پروکایوتی کلون وبیان شود. در مطالعات In silico پیشگویی ساختاردوم وسوم فیوژن پروتئین انجام گردید که نشان داد بیان این ساختار منجر به تولید پروتئینی با دوحوزه (دمین) می شود که به وسیله یک رابط (لینکر) کوچک به هم متصل شده اند. آنالیزهای بیوانفورماتیک نشان داد که اندازه فیوژن طراحی شده 2349bp است که نوکلئوتیدهای 984-1 مربوط به پروتوتوکسین اپسیلون وپپتیدعلامتی آن است. نوکلئوتیدهای 1020-985 (36bp) مربوط به توالی لینکراست که برای E.coli ، optimize می شود و 2349-1021 (bp1328) توکسین بالغ آلفا می باشد.مطالعه بیوانفورماتیک حاضرنشان داد که فیوژن ژن اپسیلون- آلفا طراحی شده درصورت بیان می تواند فیوژن پروتئین اپسیلون-آلفا را تولید کند.