شناسائي جدايه هاي Sinorhizobium meliloti بومي بر اساس توالي 16SrRNA

[ هوشنگ خسروي ] - دانشجوي دكتري دانشكده مهندسي آب و خاك دانشگاه تهران
[ حسينعلي عليخاني ] - استاديار دانشكده مهندسي آب و خاك دانشگاه تهران
[ باقر يخچالي ] - استاديار پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري و دانشكده مهندسي آب و خاك دانشگاه تهران

خلاصه مقاله:

مقايسه تواليهاي rRNA ابزاري قوي براي روابط فيلوژني و تكاملي در بين باكتريها، آركئا و موجودات يوكاريوت است . اين روشها تأييدي مطمئن براي شناسايي باكتريها تا سطح سويه ميباشد . باكتري Sinorhizobium meliloti از نظر كشاورزي داراي اهميت زيادي است زيرا اين باكتري با يونجه كه يكي از گياهان علوفهاي مهم و منبع تغذيه دامها ست رابطه همزيستي تثبيت كنندگي نيتروژن مولكولي هوا را دارد . بيش از 600 هزار هكتار از مزارع ايران زير كشت يونجه ميباشند . در اين تحقيق 5 جدايه از باكتري Sinorhizobium meliloti بومي خاكهاي مناطق مختلف
ايران از نظر توالي 16srRNA مورد بررسي قرار گرفتند . براي اين منظور با توجه به دشواري استخراج DNA از ريزوبيوم با استفاده از روش فنل كلروفرم اصلاح شده ) Agrawal و همكاران، (2006 از پنج جدايه DNA ژنومي استخراج شد ( شكل DNA (.1 ژنومي با استفاده از PCR و پرايمرهاي fD1 و Weisburg ) rD1 و همكاران، (1991 از نظر تكثير توالي 16 srRNA مورد بررسي قرار گرفتند . شرايط PCR براي جدايههاي مختلف در جدول 1 آمده است . واكنشها در حجم 25 ميكروليترحاوي 70 mmol/l بافر 2/5 mmol/L ,PCR از MgCl2 ، 200 mmol/L از هر 1 µmol/L ، dNTPsاز هر پرايمر، حدود30 نانوگرم ازDNA و 1/5 واحد taq DNA پليمراز در 30 سيكل انجام شد .