CIVILICA We Respect the Science
(ناشر تخصصی کنفرانسهای کشور / شماره مجوز انتشارات از وزارت فرهنگ و ارشاد اسلامی: ۸۹۷۱)

طراحی ژن، همسانه سازی و بیان پپتید نوترکیب دارویی تری پاراتید در باکتری اشریشیاکولی

عنوان مقاله: طراحی ژن، همسانه سازی و بیان پپتید نوترکیب دارویی تری پاراتید در باکتری اشریشیاکولی
شناسه ملی مقاله: CBGCONF02_433
منتشر شده در دومین همایش ملی پژوهش های کاربردی در علوم شیمی، زیست شناسی و زمین شناسی در سال 1393
مشخصات نویسندگان مقاله:

سپیده ساغری دوز - دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی میکروبی، سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران، تهران
ناهید بختیاری - عضو هیئت علمی پژوهشکده زیست فناوری ، سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران،تهران

خلاصه مقاله:
هورمون تری پاراتید (rhPTH) شکل نوترکیب هورمون 115 اسید آمینه ای پارتیروئید است که از غدد پاراتیروئید ترشح می شود. نقش فیزیولوژیکی این هورمون فراهم کردن کلسیم سرم و بازسازی استخوان ها است. تحقیقات نشان دادهاند که تریپاراتید سبب افزایش جذب کلسیم در استخوان می شود. بنابراین این شکل نوترکیب از سال 2002 برای درمان بیماران مبتلا به استئوپورز مورد استفاده قرار می گیرد. در بیماری استئوپورز توده استخوانی فرد مبتلا کاهش یافته و بیمار مستعد شکستگی استخوانها است. تزریق زیر جلدی داروی تری پاراتید در این افراد توده استخوانی را در هر سال 10% افزایش میدهد . هدف از انجام این پژوهش، بیان بالای تریپاراتید در اشریشیاکولی و اتخاذ راهکارهایی برای بهینه سازی تخلیص در مراحل بعدی است. برای رسیدن به این منظور، ژن حاوی اسید آمینه1 تا ۳۴پایانه ی آمینی هورمون پاراتیروئید که بخش عملگر آن است با بخشی از ژن آنزیم β- گالاکتوزیداز باکتریایی(متشکل از 52 اسید آمینه) فیوز شده و در میان توالی دو آنزیم محدودگر NcoI-BamH1 قرار گرفت . یک مکان شناسایی شونده توسط آنزیم انتروپپتیداز در انتهای بخش فیوز شده قرار داده شد . کاست طراحی شده تحت کنترل پروموتور T7 و در وکتور pET-28a کلون شد . پس از تایید توالی ژن همسانه سازی شده، پلاسمید حاوی ژن طراحی شده، به باکتری E. coli BL21 (DE3) منتقل گردید. بیان ژن مذکور پس از القاء با (IPTG(0.2 mM به میزان مناسب مشاهده شد. جهت تایید بیان کاست طراحی شده، از وسترن بلات استفاده شد . با مشاهده بیان مناسب تری پاراتید، جهت القا بدون IPTG و تخلیص با بازدهی بالا اقدام خواهد شد .

کلمات کلیدی:
تری پاراتید، همسانه سازی، اشرشیا کولی ، نوترکیب، بیان

صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/452767/