مصطفی آقامیرزائی - دانشجوی دکتری مهندسی علوم و صنایع غذایی، گرایش میکروبیولوژی مواد غذایی، دانشگاه تبریز

؛HPLC یکی از تکنیک های بسیار خوب جداسازی تجزیه ای است. دلایل محبوبیت این روش عبارتند از حساسیت آن، سازگاری آسان آن برای انجام اندازه گیری های کمی صحیح، مناسب بودن آن برای جداسازی گونه های نافرار یا ناپایدارگرمایی و مهمتر از همه کاربرد گسترده آن است. این نوع کروماتوگرافی دامنه وسیعی در زمینه های مختلف جداسازی ازجمله آمینواسیدها، پروتئینها و نوکلئیک اسیدها، هیدروکربن ها، کربوهیدرات ها، داروها، ترپنوئیدها، حشره کش ها، آنتی بیوتیک هاو استروئیدها دارد. عوامل مختلفی مانند نوع حلال، نوع ستون، نوع آشکارساز، دمای ستون، سرعت جریان، نوع و غلظت فازمتحرک روی شناسایی ترکیبات در سیستم HPLC می تواند تأثیرگذار باشد. به طور مثال ستون مناسب برای شناسایی آنتی اکسیدان ها، ستون 4x100 میلی متر Hypersil BDS؛ 3 میکرومتر است اما ستون مناسب برای شناسایی و انیلین، ستون 100x21 میلی متر Hypersil BDS؛ 5 میکرومتر است. یا فاز متحرک برای شناسایی آسپارتام از ترکیب استات سدیم و متانول تشکیل شده است اما فاز متحرک مناسب برای شناسایی رنگ لیموناد NaH(2)PO4+ تترابوتیل آمونیوم دهیدروژن فسفات و استونیتریل است. یا در طعمدهندههای شیمیایی نوع آشکارساز مورد استفاده هم فلورسانس و DAD است در حالی که آشکارساز مناسب برای آنتی اکسیدان ها آشکارساز DAD است. آماده سازی نمونه نیز در شناسایی ترکیبات در HPLC بسیار مهم است که آمادهسازی نمونه تا حد بسیار زیادی به مواد مورد تجزیه بستگی دارد. به طور مثال، برای نمونههای کم چرب، استخراج مایع همراه با تحریک حمام اولتراسوند می تواند برای آماده سازی استفاده گردد . برای نمونه هایی با ماتریکس پیچیده، ممکن است که استخراج فاز– جامد، استخراج مایع/مایع، یا تقطیر بخار نیز برای آماده سازی نیاز باشد.

کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (HPLC)، آماده سازی، شرایط کروماتوگرافی، نوع و دمای ستون، آشکارساز، نوع، غلظت و سرعت فازمتحرک، ترکیبات غذایی