پایدارسازی ژن Survivin؛ به عنوان یک مارکر توموری در رده سلولی HEK293

اSurvivin ،کوچکترین عضو از خانواده ی مهارکننده های پروتیین های آپوپتوزی است . Survivin دارای 142 آمینو اسید است که توسط یک ژن در ناحیه q25 کروموزوم 17 کد می شود. Survivin یک پروتیین چندعملکردی است که باعث مهار آپوپتوز،تنظیم چرخه سلولی و افزایش رگزایی می شود. این پروتیین در سلول های سرطانی برخلاف سلول های بالغ، بیان بالایی دارد. نقش مهم Survivin در سلول های سرطانی، این پروتیین را به یک هدف مهم درمانی برای مهار رشد سلول های سرطانی و بررسی های دارویی، تبدیل کرده است. در این مطالعه، ژن Survivin در ناقل یوکاریونیک pDB2 کلون شد. بدین منظور محتوای RNA کل از سلول های سرطانی MCF-7 استخراج و پس از سنتز cDNA، ژن Survivin تکثیر شد. محصول PCR و همچنین ناقل با آنزیم های برشی Hind III و Nhe Iبرش داده شد و عمل الحاق صورت گرفت. محصول الحاق ژن و ناقل، به باکتری DH5α E.coli ترنسفورم شد و با آنتی بیوتیک کانامایسین بررسی شد. پلازمید کلون های مثبت (دارای ناقل) به روش colony PCR و تعیین توالی (Macrogen, Korea) ورود قطعه مورد نظر را تایید کرد. در ادامه جهت بررسی عملکرد پروتیین Survivin و اثرات داروی علیه آن، ژن کلون شده ی Survivin به رده سلولی HEK293 ترنسفکت شد. رده سلولی HEK293 به جهت رشد وترنسفکت خوب،رده ی سلولی رایجی در سیستم های زیستی است. بنابراین ناقل های حاوی ژن Survivin با فاکتور شیمیایی polyethyleneimine (PEI) وآنزیم اینتگراز در رده سلولی HEK293 ترنسفکت و پایدار شد و این عمل با آنتی بیوتیک G418 بررسی شد. ورود ژن Survivin و افزایش بیان پروتیین Survivin به کمک سنجش caspase 3-7 و روش Real time PCR تایید شد.

کلیدواژه ها:

آنزیم اینتگراز ، Survivin ، HEK293 ، Caspase 3-7