خالص سازی و سنجش فعالیت پروتیینDnaJباکتریBacillus PersicusسویهیB48 T

پروتیینهای شوک حرارتی (HSPs)، گروهی از پروتیینهای همولوگ هستند که دارای شکلهای هم ساختار میباشند و در باکتری و همچنین میتوکندری، کلروپلاست و سیتوزول سلولهای یوکاریوتی یافت میشوند. از جمله عملکردهای این گروه مولکولی بزرگ کنترل چرخهی سلولی، تنظیم پاسخ ایمنی، تا خوردگی صحیح پروتیینها، سیگنال دهی و تنظیم آپاپتوز میباشد. DnaJ همولوگ باکتریایی Hsp40 (در یوکاریوتها) میباشد. هدف از این مطالعه خالص سازی و سنجش فعالیت پروتیین DnaJ از باکتری Bacillus Persicus برای اولین بار میباشد. ژن DnaJ از باکتری B. Persicus شناسایی، توالییابی و کلون شد و به منظور بیان به سویهی بیانی BL- 21 ترانسفرم شد. سپس خالص سازی و سنجش میزان فعالیت این پروتیین نیز انجام گرفت. بیان پروتیین در دمای 37 درجه-ی سانتیگراد و در زمان انکوباسیون 6 ساعت صورت گرفت. با توجه به دنباله ی هیستیدینی در توالی آمینواسیدی پروتیین، از روش کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از ستون نیکل سفارز استفاده شد. وجود تک باند دیده شده بر روی ژل SDS-PAGE در محدودهی 40 کیلودالتون موید خالص شدن صحیح پروتیین میباشد. جهت بررسی توان عملکردی این پروتیین، میزان فعالیت آنزیم کربونیک انهیدراز در عدم حضور و حضورDnaJ مورد سنجش قرار گرفت که موجب افزایش 39 درصدی فعالیت آنزیم در حضور کوچاپرون DnaJ میباشد.

کلیدواژه ها:

آپاپتوز ، پروتیین ، چاپرون ، خالص سازی ، کوچاپرون