بررسی غلظت پروتئین نوترکیب دفنزین حاصل از بیان موقت در گیاه با استفاده ازتعیین گروههای تیول آمینواسید سیستئین در آن

دفنزینهاگروهی از پپتیدهای ضدمیکروبی هستند که به طور وسیعی در مهره داران، بی مهره گان و گیاهان یافت میشوند و به طور طبیعی جزء سیستم ایمنی موجودات پر سلولی محسوب میشوند. این عوامل پپتیدی کوچک انواع مختلقی دارند که در برابر طیف وسیعی از عوامل میکروبی فعالیت دارند. ژن دفنزینی که در این تحقیق مورد مطالعه قرار گرفته است، ژن SDmod ، یک ژن دفزین دستکاری شده است و بر دامنه وسیعی از باکتریها و قارچ ها اثر بازدارنده دارد. در این مطالعه روشی آسان و کم هزینه برای تعیین غلظت پروتئین نوترکیب حاصل از بیان موقت ژن SDmod معرفی شده است. این روش بر اساس تعیین گروههای تیول آمینواسید سیستئین موجود در پروتئین با استفاده از تست المن استوار است در این روش از ترکیبی به نام DTNB ( 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid که قادر است با گروه تیول آزاد در پروتئین واکنش دهد و S احیا یا سولفیدریل تولید نماید استفاده می شود. به این منظور ابتدا ژن SDmod که در پلاسمید pBISN1-IN همراه با ژن نشانگر licBM2 کلون شده است به روش Agroinfiltration به صورت موقت در گیاه لوبیا بیان و سپس پروتئین حاصل استخراج و میزان تیولهای آزاد اسیدآمینه سیستئین در آن بررسی شد. این روش برای تعیین میزان پروتئین نوترکیب دفنزین روشی آسان و کمهزینه است. از این روش می توان برای تعیین میزان پروتئین تولید شده در اثر بیان موقت ژن استفاده نمود. اگرچه استفاده از میزان فعالیت آنزیم لیکیناز که بهعنوان نشانگر بیان ژن همراه با دفنزین بیان میشود راهی موثر در تعیین میزان بیان ژن نیز هست اما با استفاده از روش جدید میتوان میزان بیان ژن دفنزین را براساس حضور خود پروتئین، و نه فعالیت آنزیم همراه با آن، بررسی نمود.

کلیدواژه ها:

دفنزین ، Agroinfiltration ، روش المن