تولید موتانتهای ژن آنزیم کیتیناز Bacillus pumilus SG2 و بررسی تغییرات فعالیت کیتینازی آنها بر ضد قارچ های بیماری زای گیاهی

سال انتشار: 1391
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 723

فایل این مقاله در 6 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

CIGS12_0021

تاریخ نمایه سازی: 5 بهمن 1392

چکیده مقاله:

باکتری Bacilhus pumilus سویه SG2 قبلاً از خاک های شور جدا شده بود و نشان داده شد که دارای توانایی کیتینازی در شرایط نمکی بالا می باشد. سوپ رویی از کشت B.pumilus SG2 که با ؟؟؟؟ القا شده بود دارای دو باند می باشد که بعد از توالی یابی اسید آمینه کیتیناز chiL و chiS نامیده شد. در تحقیق سلولها تحت تأثیر اشعه فرابنفش و اسید نیتروس برای ایجاد موتاسیون در آنها قرار گرفتند. سلول های رویشی B.pumilus ابتدا با اشعه فرابنفش (در محدوده طول موج 240 نانومتر) تیمار شده و سپس در معرض اسید نیتروس قرار گرفتند (0/2 مولار). باکتریهای زنده مانده مورد غربالگری از نظر قابلیت تجزیه کیتین بر روی محیط (Bacilus subtilits miniml medium)BSS آگار دارا با 1% کیتین قرار گرفت سپس جه یافته ها رشد داده شد و هاله های شفاف دورکلونی ها ظاهر شد، که نشان دهنده توانایی تجزیه کیتین بالا و پائین و یکسان نسبت به سویه وحی بودند. از میان چندین کلونی تست شده سویه B.pumilus AV2-9 با قابلیت ایجاد هاله بزرگتر شناسایی شد و ظرفیت فعالیت کیتینازی آن از لحاظ کمی توسط DNS enzyme assay تست شد که بعد از رشد روی محیط BSS کیتین دار برای تولید کیتیناز، سویه های وحشی (SG2) و موتانت (AV2-9) با یکدیگر مقایسه شدند. توالی نوکلئوتیدی کل اوپرون کیتیناز (شامل پروموتر و ناحیه کد کننده دو کیتیناز ChiS و ChiL)، برای دو سویه SG2 و AV2-9 مقایسه شد و اسید آمینه مورد نظر تغییر یافته شناسایی شد. جهت زایی کلاسیک SG2 سلول ها منجر به جداسازی موتانت با فعالیت بیشتر کیتینازی شد. نتایج نان داد که کیتیناز AV2-9 دارای فعالیت کیتیناز بیشتری نسبت به سویه وحشی می باشد. که سنجش آنزیم تعیین کرد که AV2-9 دارای بالاترین فعالیت است، توالی و هم ترازی نشان داد که اسید آمینه (G) جهش یافته، و به اسید آمینه (E) در chil تبدیل شده است.

نویسندگان

مجید واحد

پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، بلوار پژوهش، تهران، ایران

غلامرضا احمدیان

پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، بلوار پژوهش، تهران، ایران

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • isolated from saline conditions produces and secretes two chitinase, J ...
  • ; 3. Henrissat, B. 1991, A classification of glycosyl hydrolases ...
  • Justin, C., Khodursky, A., Peter, B., Brown, P.O. and Hanawalt, ...
  • : s. Keyhani, N. O. and Roseman, S. 1999. Physiological ...
  • : 6. Kitamura, E. and Kamei, Y. 2003. Molecular cloning, ...
  • نمایش کامل مراجع