کلونینگ ژن آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی سوش DSM 4610 در وکتور بیانی Paed4

اکنون ال-آسپاراژیناز، در درمان ملکولی لوسمی پیشرفت قابل ملاحظه ای کرده است. امروزه این آنزیم از دو م نبع باکتریایی E.coli و Erwinia chrysanthemi جدا ده و بصورت تجاری بعنوان داروی ضد سرطان (لوکمی لنفوبلاستیک حاد و لنفومای غیر هوچکینی) عرضه می شود. خاصیت سمیت آنزیم در درمان، مربوط به فعالیت L- گلوتامینازی آن است. L- آسپاراژینازهایی که تمایل اکنون ال-آسپاراژیناز، در درمان ملکولی لوسمی پیشرفت قابل ملاحظه ای کرده است. امروزه این آنزیم از دو منبع باکتریایی E.coli و Erwinia chrysanthemi جدا شده و بصورت تجاری بعنوان داروی ضد سرطان (لوکمی لنفوبلاستیک حاد و لنفومای غیر هوچکینی) عرضه می شود. خاصیت سمیت آنزیم در درمان، مربوط به فعالیت L- گلوتامینازی آن است. L- آسپاراژینازهایی که تمایل بالا برای L- آسپاراژین و تمایل پائین برای L- گلوتامین دارند، طی درمان ضد سرطانی، کم دردسر سازتر می باشند. بنابراین شناسائی ال- آسپاراژیناز نوترکیب از اروینیا کریزانتمی که در این تحقیق انجام گردید، گاهی در مسیر این پیشرفت می باشد. در این تحقیق ژن ans B به درون وکتور بیانی pAED4 به منظور بررسی امکان بیان و آنالیزهای بیشتر کلون شد. ابتدا وکتور کلونینگ حامل این ژن (pTZ57R) به منظور تکثیر در مقادیر زیاد به باکتری Ecoli ترانسفرم گردید. آنگاه پس از جداسازی و تخلیص پلاسمید و تأئید صحت DNA تکثیر شده، واکنش PCR با کمک پرایمرهای اختصاصی پیرو و پیشرو طراحی ده توسط نرم افزار Oligo انجام گرفت. سپس ژن و وکتور بیانی با کمک آنزم های Hind III, Nde I برش داده شدند و نهایتاً طی مرحله Ligation، ژن آسپاراژیناز به درون وکتور بیانی که جهت بیان در BL21 طراحی شده و حاوی کلونینگ سایت های مناسب بود کلون شد. در آخر PCR با پرایمرهای طراحی شده بر روی وکتور بیانی انجام گرفت که تأئیدی بر تکثیر ژن مورد نظر بود. به نظر می رسد بیان این ژن بتواند بعنوان کاندید ایده ال به منظور ارزیابی اثرات کلینیکی و همچنین مناسب به عنوان یک آنزیم ضد لوکمی برای مطالعات بیشتر می باشد.

کلیدواژه ها:

ال-آسپاراژیناز ، اروینیا کریزانتمی ، Paed4 ، کلونینگ