همسانه سازی ژنهای تولید کننده پلی 3-هیدروکسی بوتیرات (P3HB) در باکتری E.coli سویه های DH5α و BL21

پلی هیدروکسی بوتیرات (PHB)، دسته ای از پلی هیدروکسی آلکانوآت (PHA)، گروهی از پلیمرهای ذخیره ای باکتریایی می باشند که بوسیله ی ارگانیسم های متعددی در پاسخ به محدودیت غذایی تولید می رگردند. پلی هیدروکسی آلکانوآت (PHA)، به دلیل ویژی تجزیه پذیری زیستی کاندیدای بالقوه ای برای جایگزینی پلاستیکهای پتروشیمیایی می باشد. پلی (3-هیدروکسی بوتیرات)(P(3HB، رایجترین نوع PHA است که توسط 3 آنزیم به نام های 3-کتوتیولاز، استواستیل CoA ردوکتاز و PHA سنتاز تولید می گردد. در بکارگیری تولید کننده ی PHA طبیعی، محدودیت هایی وجود دارد. باکتری های تولید کننده ی طبیعی PHA معمولاً در بردارنده ی ماشین ذاتی برای تجزیه ی پلیمر هستند و اغلب به سختی لیز می شوند و زمان تولید مثلی طولانی و دمای رشد بهینه ی نسبتاً پائینی دارند و همچنی بازیافت PHA دشوار است. مزایای به کارگیری E.coli نوترکیب برای تولید PHA شامل رشد سریع، تراکم سلولی بالا، توانایی در استفاده ی چندین منبع کربن ارزان و تخلیص آسان است. در این مطالعه وکتور بیانی pET28pha (پلاسمید pET28a حاوی ژنهای phb) به 2 سویه از E.coli شامل یک سویه کلونینگ DH5α و یک سویه بیانی BL21 ترانسفورم گردید. صحت ترانسفورماسیون با 3 روش colony PCR، هضم آنزیمی پلاسمید استخراج شده و تعیین توالی تأئید کردید. این وکتور می تواند برای بیان و القای ژنها یphb و سرانام تولید PHB بکار رود.

کلیدواژه ها:

پلی هیدروکسی بوتیرات (PHB) ، پلی هیدروکسی آلکانوآت (E.coli ، pET28pha ، (PHA سویه ی DH5α و BL21