جهش زایی in vitro با هدف افزایش خاصیت فلورسانس در ژن rice ns LTP2

پروتئین های (nonspecific lipid transfer proteins)NSL TPs پروتئین های گیاهی هستند که بر اساس وزن مولکولی به دو گروه nsLTP1 و nsLTP2 تقسیم بندی می شوند. این پروتئین ه ای بسیار مقاوم علاوه بر پتانسیل حمل داروها می توانند آنها را در برابر اکسیداسیون یا تجزیه شدن محافظت کنند. مولکول nsLTP2 گیاه برنج، به دلیل توانایی ذاتی عبور از غشا و اتصال به ترکیبات استروئیدی (از جمله برخی ترکیبات داروئی) پتانسیل استفاده در سیستم تحویل داروئی را دارا می باشد. هدف: به منظور افزایش توانمندی های این پروتئین در چنین سیستمی لازم است که در ساختار آن تغییراتی صورت پذیرد. این تغییرات را می توان با استفاده از ایجاد جهش های مطلوب در ژن کد کننده ی این پروتئین اعمال کرد. هدف این پژوهش ایجاد جهش های هدایت یافته مکانی بمنظور افزایش خاصیت فلورسانس، در ژن rice nsLTP2 در نظر گرفته شده است. روش: با بررسی نرم افزاری ساختار سه بعدی و حفره هیدروفوبیک این پروتئین محل های اعمال جهش مشخص و پرایمرهای موتاژنیک (حاوی جهش تبدیل تیروزین 45 به تریپتوفان (Y45W) طراحی گردید و از روش (Extension- Polymerase Chain Reaction Single Overlap)SOE-PCR به منظور ایجاد جهش در ژن کد کننده nszLTP2 برنج استفاده و کلونینگ ژن موتانت دروکتور pET32a انجام شد. نتایج: پس از تکثیر قطعات موتانت و تأئید جهش ایجاد شده از طریق تعیین توالی، محصول موتانت درون وکتور pET32a کلون و پس از بیان در سویه بیانی BL21(DE3)pLYSs ، پروتئین موتانت فیوژن با His-tag، تخلیص گردید. امید می رود در تحقیقات آتی از این پروتئین بتوان به عنوان یک حامل داروئی به خصوص داروهای درمان سرطان استفاده نمود.

کلیدواژه ها:

، nsLTP ، جهش زایی ، SOE-PCR ، سیستم تحویل داروئی