بررسی و بهینه سازی بیان ژن فیتاز باکتری Yersinia Intermedia در باکتری Escherichia Coli

مقدمه: فیتات بزرگترین ذخیره ی فسفات دانه ی بسیای از گیاهان می باشد و تجمعاتی را با یونهای فلزی چند ظرفیتی مانندآهن،روی،کلسیم و نیز پروتئین ها تشکیل می دهد که بیانگر اثر ضد تغذیه ای این ماده می باشد.در نتیجه، فیتاز بصورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی جهت تجزیه ی فیتات و نیزافزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک معده ای به غذای آنها افزوده می شود.هدف این مطالعه، بهینه سازی و بررسی بیان ژن فیتاز از باکتریYersinia Intermediaدر باکتریEscherichia Coliمی باشدروش : در این تحقیق،ابتدا به منظور داشتن بیشترین بیان ژن فیتاز باکتریY.IntermediaدرE.Coliکدون های رایج درY.Intermediaکه برایE.Coliنادر هستد، توسط یک سری نرم افزار های تحت وب ، به نحو مؤثری تعویض گردیدند سپس وکتور Pet22b (+)حاوی ژن بهینه شده فیتاز در باکتریE.Coliترانسفورم گردید. سپس بیان پروتئین ،توسط القا باIPTGصورت گرفت. در نهایت صحت بیان پروتئین ها توسط تکنیکSDS-PAGEبررسی شد وبا انجام وسترن بلات به حضور وبیان پروتئین اطمینان حاصل گردید. نهایتا با انجام تست بردفورد، غلظت پروتئین کل به دست آمدنتیجه: با استفاده از روشهای مذکور،میزانCAIاز0/63به 0/80 رسید. بیان پروتئین نوترکیب با ظهور باند مورد نظر روی ژلSDS-Pageبه دست آمد و نتایج آزمایش وسترن بلات نیز اتصال اختصاصی پروتئین نوترکیب را به آنتی بادی mouse anti-(His) 6 peroxidase نشان داد.

کلیدواژه ها:

فیتاز ، کدون های رایج ، بیان پروتئین ، وسترن بلات