بررسی تاثیر جایگاهN-گلیکوزیلاسیون بر ترشح فاکتور 9 انسانی نوترکیب

گلیکوزیلاسیونN- فرایند اتصال زنجیره قندی به آسپاراژین موجود در توالیN-X-S/Tمی باشد که بر روی برخی از پروتئین های ترشحی و غشایی اتفاق می افتد. مطالعات اخیر نشان داده است که با معرفی یک جایگاه جدیدN-گلیکوزیلاسیون به انتهای آمینی یاکربوکسیلی برخی از پروتئین ها، می توان ترشح آنها را در سلولهای یوکاریوتی افزایش داد. در تحقیق حاضر به منظور بررسی تاثیرn-گلیکوزیلاسیون بر ترشح فاکتور 9 انسانی نوترکیب در سلولهایCHOبا استفاده از روش جهش زایی هدفمند 1، دو واریانت هایپرگلیکوزیله شده فاکتور 9 انسانی ساخته شد که هر کدام دارای یک جایگاه جدید N -گلیکوزیلاسیون بودند. طراحی جایگاههای جدیدN-گلیکوزیلاسیون در انتهای آمینی و در دومین گلای فاکتور 9، بر پایه مطالعات بیوانفورماتیکی انجام شد. سپس با روش جهش زایی هدفمند، کدون مربوط به توالیN-گلیکوزیلاسیون در جایگاه های مشخص شده درcDNAفاکتور 9 انسانی وارد شد. ژنهای جهش یافته و طبیعی در وکتور بیانیpCEP4 و در پایین دست پروموترCMVهمسانه سازی شد. پس از وارد کردن سازه های نوترکیب به سلولهای CHO میزان بیان و ترشح فاکتور 9 انسانی نوترکیب طبیعی و جهش یافته ها با روش الایزا در یک بازه زمانی 72 ساعتی مورد بررسی قرارگرفت. نتایج نشان داد که میزان بیان فاکتور 9 هایپرگلیکوزیله در مقایسه با فرم طبیعی آن تا دو برابر افزایش داشته است.

کلیدواژه ها:

فاکتور 9 انعقادی انسانی نوترکیب ، N-گلیکوزیلاسیون ، سلولهایCHO ، ترشح پروتئین