کلونینگ و بیان ژن مایو اینزیتول هگزاکیس فسفات فسفو هیدرولاز(appA)در اشرشیاکلی

قسمت اعظم فسفر جیره با فیتات باند شده و مانع جذب مواد معدنی می گردد. مایو اینزیتول هگزاکیس فسفات فسفو هیدرولاز (فیتاز)فیتات را به مایو اینزیتول فسفات های پایین تر و در بعضی از موارد مایو اینزیتول های آزاد هیدرولیز می کند. در این مطالعه،ژن فیتازباکتری اشرشیاکلی 1398PTCCبا استفاده از پرایمرهای لینکردار حاوی سایت های برشیHindIII وECORIجداسازی شد. ژن هدف به پلاسمیدpTZ57 R/Tبه منظور توالی یابی و سپس به پلاسمیدpET21a(+)به منظور بیش بیان انتقال داده شد. روش های کلونی PCR هضم و توالی یابی به منظور تایید حضور ژن در پلاسمید بیانی استفاده گردید. باکتری اشرشیاکلیBL21(DE3 نوترکیب در محیط کشت LBحاوی آمپی سیلین در دمای 30 درجه سانتیگراد کشت داده شد و به منظور اندازه گیری فعالیت آنزیمی با استفاده ازIPTGیک میلی مولار تحریک گردید. تولید پروتئین نوترکیب فیتاز با استفاده ازSDS-PAGE تایید شد. وزن مولکولی پروتئین فیتاز با توالی های که از پلاسمیدpET21a(+)به آن اضافه شده، 46 کیلو دالتون تخمین زده شد. مطالعه ما نشان داد که این آنزیم دارای ویژگی های بی همتایی است و می تواند در صنعت داروسازی و طیور بکار گرفته شود

کلیدواژه ها:

اسید فایتیک ، فیتاز ، بیان ژن ، اشرشیاکلی