سازگاری رده سلولی MC3T3 با محیط کشت DMEM

مقدمه: رده سلولی MC3T3، سلولهای پیش ساز استئوبلاست استخراج شده از موش C57BL/6 هستند و بعنوان مدلی از استخوان در تستهای بیولوژیک و بررسی مسیرهای پیام رسانی کاربرد دارند. محیط کشت اختصاصی این سلولها (ɑ-MEM) Alpha Minimum Essential Medium به همراه 10 درصد سرم گوساله (FBS) و 2Mm اسید آمینه ال گلوتامین می باشد. این سلولها مشابه فیبروبلاست هستند و بعد از کشت به سطح فلاسک می چسبند و برای پاساژ های بعدی باید از آنزیم تریپسین برای جداسازی استفاده کرد. محیط کشتɑ-MEM بسیار گران بوده و در ایران دسترسی به آن مشکل است. با توجه به این موارد در این مطالعه سعی شد به روش تدریجی این سلولها را با محیط کشت Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) که به صورت روتین در اتاقهای کشت استفاده می شود و در کشور ما در دسترس است سازگار نماییم.هدف از این مطالعه سازگار سازی رده سلولی MC3T3 با محیط کشت DMEM است.روش تحقیق: بعد از خارج کردن ویال فریز شده سلولها از تانک ازت تعداد6×105 سلول در فلاسک به همراه 12 سی سی محیط کشت ɑ-MEM ،FBS و گلوتامین کشت داده شد. تدریجا محیط کشت به ترتیب با 70،60،50،40،30،20،10،80،90 و100 درصد محیط کشت DMEM حاوی FBS و گلوتامین جایگزین گردید. در هر مرحله تعداد سلولها و میزان زنده بودن آنها بررسی شد. برای مقایسه، در یک گروه سلولها مستقیما از ابتدا با محیط کشت DMEM و در گروه دیگر با محیط کشت اختصاصی ɑ-MEM کشت داده شدند. در انتها سلولها از لحاظ تعداد و مورفولوژی باهم مقایسه شدند. یافته ها: کشت مستقیم سلولهای MC3T3 در محیط DMEM به شدت بر رشد این سلولها اثر گذاشت بطوریکه تعداد سلولها نسبت به کشت مستقیم در محیط اختصاصی ɑ-MEM به کمتر از نصف رسید. در مقابل باافزایش تدریجی محیط کشت DMEM، تکثیر سلولها روند مناسبی را طی کرد. همچنین، در هر دو روش تفاوتی در شکل ظاهری سلولها مشاهده نشد.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که با افزایش تدریجی محیط کشت DMEM و جایگزینی محیط کشت اختصاصی ɑ-MEM میتوان رده سلولی MC3T3 را سازگار نمود. ضمنااین روش سازگاری می تواند در مورد سلولهای دیگر نیز کاربرد داشته باشد.

کلیدواژه ها:

تطبیق تدریجی ، MC3T3 ، DMEM