ھمسانھ سازی و بررسی ویژگی ھای ژن RGT2از سویه ایرانی مخمر نان

مخمر Saccharomyces cerevisiaeدارای 20 ژن کدکننده پروتیین های انتقال دهنده هگزوز بهRGT2 وSNF3 میباشد. دو ژنRGT2 وSNF3 ،GAL2 ،HXT1-HXT17 است که شاملعنوان حسگر گلوکز عمل کرده و ژن های HXT1-HXT17 در انتقال مستقیم گلوکز نقش دارند.پژوهشگران ثابت کردند که با افزایش میزان بیان این ژنها سرعت تخمیر الکلی افزایش و درنتیجه آن میزان تولید اتانول افزایش مییابد. هدف این مطالعه شناسایی و جداسازی ژن RGT2 و همسانه سازیPCR از طریقS. cerevisiae از ژنوم مخمرRestores Glucose Trans port2 یاآن در پلاسمید دارای پیشبر بیانی مناسب به منظور پایهای برای طراحی پلاسمید بیانی و درنهایت مخمر نوترکیب بود. در این تحقیق پس از تهیه آغازگرهای اختصاصی، ژن مورد نظر باروش PCR تکثیر شد و واکنش لیگاسیون بین قطعه تکثیر یافته و پلاسمید pGEM-T انجام وکلونیهای ترانسفورم شده از طریق سیستم گزینش آبی- سفید شناسایی شدند و در نهایت برایتایید نهایی قطعات همسانه شده، پلاسمیدهای نوترکیب به توالییابی فرستاده شدند. بررسینرمافزاری نشان داد که این ژن پروتیینی با وزن مولکولی 83/173کیلودالتون را کد کرده ودارای 763اسیدآمینه بوده و نقطه ایزوالکتریک آن 5/68میباشد. در ادامه، ژن RGT2 از طریقمحلهای برش آنزیمی PstI و NcoIدر پلاسمید pGBKT7 همسانه سازی شد. توالی پروتیینیبدست آمده شباهت زیادی با RGT2p سویه های دیگر S. cerevisiae موجود در NCBI از جملهسویه P301( 100درصد تشابه) نشان داده و بررسی های فیلوژنتیکی با استفاده از سایر ژن هایخانواده انتقال دهنده های هگزوز نشان داد که RGT2 بیشترین ارتباط و شباهت را با SNF3 دارد.با جداسازی و همسانه سازی و تعیین ویژگی و در نهایت انتقال این ژن به مخمر میتوان میزانتولید اتانول را طی تخمیر الکلی افزایش داد

کلیدواژه ها:

پلاسمید نوترکیب ، RGT2 ، مخمر ، S. Cerevisiae ، همسانه سازی