همسانه سازی و انتقال آنزیم T7RNA پلیمراز باکتریوفاژ T7 به توتون

کشاورزی مولکولی به تولید پروتیین های دارویی و آنزیم های صنعتی توسط گیاهان از طریق مهندسی ژنتیک اطلاق می شود. آنزیم T7RNA پلیمراز یکی از مهمترین آنزیم هاست که به طور وسیعی در زمینه های مختلف بیوتکنولوژی و زیست شناسی سلولی و مولکولی، از قبیل سنتز و مطالعه ساختار و عملکرد RNA ها در شرایط آزمایشگاهی استفاده می شود. RNAهای سنتز شده در شرایط آزمایشگاهی در هیبریداسیون، ریزآرایه، آزمایشات RNAi و RNA آنتی سنس کاربرد دارد. این آنزیم همچنین در سیستم های بیانی وابسته به پیشبر و خاتمه دهنده T7 کاربرد فراوان دارد. آنزیم T7RNA پلیمراز یک آنزیم باکتریوفاژی بوده و فعالیت اصلی آن در سیتوپلاسم می باشد. تحقیق حاضر جهت همسانه سازی، انتقال ژن آنزیم T7RNA پلیمراز به هسته سلولهای یوکاریوتی و تولید آن در گیاه توتون انجام گرفت. آغازگرهای مناسب از روی توالی ژن T7RNA پلیمراز به همراه توالی های مناسب برای آنزیم های برشی، طراحی و ژن T7RNA پلیمراز مورد نظر پس از جداسازی در ناقل بیانی pCAMBIA1304 همسانه سازی شد. به منظور اطمینان از همسانه سازی، سازه تهیه شده با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی بررسی شده و همردیفی آن در بانک اطلاعاتی اسیدهای نوکلییک تایید گردید. سپس، سازه نوترکیب به کمک سویه LB4404 آگروباکتریوم به گیاهان توتون منتقل و گیاهان تراریخته بر روی محیط های کشت انتخابی حاوی آنتی بیوتیک های هیگرومایسین و سفوتاکسیم، باززا شدند. حضور و بیان ژن T7RNA پلیمراز در گیاهان تراریخته با روش های PCR و RT- PCR تایید شد.

کلیدواژه ها:

آنزیم T7RNA پلیمراز ، همسانه سازی ، انتقال ژن ، توتون ، کشاورزی مولکولی