بیان آنتی بادی مونوکلونال هرسپتین در سلول های یوکاریوتی و آنالیز کاهش بیان HER2 در رده های سلولی سرطان پستان

اHER2 از خانواده گیرندهی تیروزین کینازها میباشد که بیان بیش از حد آن در % 30-25 مبتلایان به سرطان پستان دیده می شود و هرسپتین اولین آنتی بادی مونوکلونال humanized شده بر علیه HER2 می باشد. تولید این آنتی بادی تجاری در داخل کشور علاوه بر دستیابی به دانش فنی تولید آنتی بادی های مونوکلونال می تواند زمینه ساز تحقیقات در زمینه مسیرهای سیگنال دهی داخل سلولی فراهم می آورد.مواد و روش ها به منظور تولید هرسپتین، توالی نوکلیوتیدی دو زنجیره سبک و سنگین هرسپتین سنتز شیمیایی شد. سپس زنجیره سنگین و سبک در یک ناقل لنتی ویروسی برای انتقال هر دو زنجیره به سلول یوکاریوتی کلون گردید. سپس سازه حامل زنجیره سبک و سنگین با استفاده از روش -DNA کلسیم فسفات به سلول های مولد ویروس ترانسفکت شد. پس از تولید لنتی ویروس های نوترکیب سلول های 293T با آن ها آلوده شد. هرسپتین ترشح شده در محیط کشت سلول ها، جمع آوری و تغلیظ گردید. اتصال و تاثیرگذاری هرسپتین بر رده های سلولی پستان HER2+ با استفاده از تست ایمونوسیتوشیمی و MTT assay انجام شد. کاهش بیان گیرنده ی HER2 در سلول های تیمار شده با هرسپتین با تکنیک RT-PCR انجام شد و نتایج حاصل از آن بر روی ژل آگارز تایید گردید..یافته ها نتایج آزمایشات هضم آنزیمی کلونینگ صحیح هر دو زنجیره را در وکتور لنتی ویروسی تایید کرد.نتایج RT-PCR، پس از ترانسفکشن و ترانسدوکشن سلول HEK-293T بیان هر دو زنجیره را در سلول تایید کرد.نتایج ایمونوسیتوشیمی و MTT assay اتصال و تاثیرگزاری هرسپتین را بر سلول های سرطانی تایید کرد.نتایج PCR در 3 رده ی سلولی مختلف کاهش بیان گیرنده HER2 را در پاسخ به هرسپتین نشان می دهد.نتیجه گیری آنتی بادی تولید شده از فعالیت بیولوژیکی اختصاصی در اتصال به گیرنده HER2، مهار بیان و فعالیت بیولوژیکی گیرنده برخوردار است. این آنتی بادی می تواند رشد سلول های سرطانی را با کاهش بیان گیرنده HER2 مهار و مرگ را در این سلول ها القاء کند.

کلیدواژه ها:

هرسپتین ، HER2 ، سرطان پستان.