ردیابی همولوگ ژن توماتیناز در ژنوم قارچ Fusarium oxysporum f.sp. melonis

قارچ های بیماری زای گیاهی جهت غلبه بر سیستم دفاعی گیاه از ابزار مختلفی بهره می گیرند. ترکیبات فیتوآنتیسیپین از جمله مواد دفاعی است که در گیاه جهت جلوگیری از حمله بیمارگرها تولید می شود. آنزیم توماتیناز جهت تجزیه فیتوآنتیسیپین و غلبه بر سیستم دفاعی گیاه توسط طیفی از قارچ ها از جمله تعدادی از فرم های اختصاصی قارچ F. oxysporum تولید می شود. با هدف ردیابی توالی کد کننده آنزیم توماتیناز در فرم اختصاصی Fusarium oxysporum f. sp. melonis (Fom) آغازگرهای اختصاصی بر اساس توالی محافظت شده بالادست و پایین دست توالی کدکننده ژن FoTom1 گزارش شده از فرم اختصاصی Fusarium oxysporum f. sp. lycopercisi (Fol). طراحی شد. استخراج DNA از نژاد یاشایع در استان خراسان انجام شد و واکنش تکثیر با استفاده از آغازگرهای اختصاصی صورت گرفت. الگوی الکتروفورزی محصول واکنش حضور یک تک باند در اندازه مورد انتظار را تایید نمود. قطعه تکثیر شده بصورت دو جهته توالی یابی شد و با توالی گزارش شده از فرم اختصاصی Fol مورد مقایسه قرار گرفت. نتایج توالی یابی با استفاده از برنامه Vector NTi V11 بر هم منطبق شد و با توالی رفرنس همردیفی انجام شد. نتایج نشان داد در سطح نوکلیوتیدی 14 جهش در توالی شناسایی شده وجود دارد که از این بین 7 جهش در سطح توالی پروتیینی نیز بروز می یابند. آنالیز توالی با استفاده از برنامه Pfam وجود ی توالی سیگنال پپتید و ی دومین هیدرولازی را در توالی شناسایی شده تایید نمود. این نتایج نشان داد که توالی ردیابی شده میتواند همولوگ ژن توماتیناز در ژنوم فرم اختصاصی Fom باشد. این توالی Fom-Tom نامگذاری شد و در بان ژن با شماره بازیابی MF178403 ثبت شد. با هدر پیش بینی اثر جهش ها شناسایی شده در عملکرد ژن توماتیناز آنالیزهای نرم افزاری انجام شد که نشان داد جهش های رخ داده در توالی دومین هیدرولازی ساختمان پروتیین را تحت تاثیر قرار می دهند و می توانند در عملکرد ژن تاثیرگذار باشند.