شناسایی آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت های سلولی به روش PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی 16S Rrna

مقدمه: مایکوپلاسماها از مه مترین و جد یترین آلوده کننده های کشت های سلولی و فرآورده های بیولوژیک تولیدی در کشت های سلولی می باشد. تشخیص مایکوپلاسماها بر پایه کشت و روش های مولکولی می باشد. این روش ها از نظر سرعت، اطمینان، ویژگی و حساسیت با یکدیگر متفاوت هستند. هدف اصلی این مطالعه ردیابی آلودگی های مایکوپلاسمایی درنمونه های کشت با استفاده از پرایمرهای اختصاصی 16S rRNA بر اساس تکنیک PCR می باشد. مواد و روش ها: توالی ژن 16S rRNA گونه های مایکوپلاسمای آلوده کننده کشت های سلولی از بانک ژن استخراج و هم ردیف سازی گردید. پرایمرهای اختصاصی با استفاده از ترادف های به دست آمده، طراحی شد. برای ساخت کنترل مثبت، توالی ژن 16S rRNA به روش PCR تکثیر و سپس در وکتور پلاسمیدی کلون شد. نتایج: الکتروفورز محصول PCR ژن 16S rRNA مطابق انتظار باندی به طول 219 bp را بر روی ژل آگاروز نشان داد. این الگو در نمونه های کنترل منفی دیده نشد. همچنین تکثیر قطعه ای به همین اندازه در پلاسمید نوترکیب حاصل، صحت کلونینگ را تایید کرد.بحث و نتیجه گیری: این روش با داشتن مزیت هایی مانند سرعت بالا و دقت زیاد از پتانسیل مناسبی برای استفاده در آزمایشگاه های کشت سلول برخوردار است.

کلیدواژه ها:

مایکوپلاسما ، واکنش زنجیره ای پلیمراز ( PCR ) ، کشت سلولی