کلونینگ و بیان ژن VP3ویروس بیماری عفونی دراشرشیاکولی و تخلیص پروتیین VP3نوترکیب

بیماری بورس عفونی یاگامبورو یکی ازبیماریهای ویروسی بسیارواگیرطیور است که درصنعت طیور درسراسر جهان باعث زیانهای اقتصادی میشود ازانجایی که پس ازعفونت باویروس بیماری بورس عفونی IBDV اولین انتی بادیها برضد پروتیین ساختمانی VP3 تولید میشود این پروتیین انتی ژن مناسبی برای استفاده درالیزا می باشد باتوجه به دشوار بودن تهیه VP3 طبیعی ازIBDV یا سلولهای الوده به ویروس VP3 سویه ویروس واکسن D78 درپلاسمید pMal-C2 X یک پلاسمید بیانی پروکاریوتی و بیان و خالص سازی پروتیین نوترکیب انجام گردید بنابراین ژن VP3 باازمایش RT-PCR تکثیر داده شده و پس ازهضم باانزیم های محدودگرمناسب درپلاسمید pMal-C2 X کلون گردید پس ازتعیین توالی و اطمینان ازکلونینگ موفق این ژن بیان پروتینین نوترکیب باازمایش SDS-PAGE تایید گردید درادامه پروتییننوترکیب بااستفاده ازستون کرووماتوگرافی حاوی رزین امیلوز خالص شد بررسی واکنش پروتیین VP3 نوترکیب درازمایش ایمونوبلاتینگ نشان داد که پروتیین تولید شده ازنظر انتی ژنی فعال می باشد باتوجه به راندمان بالای تولید دراین سیستم پروتیین بیان شده کاندیدای مناسبی برای طراحی ازمایش الیزا و سنجش تیترآنتی بادی علیه ویروس بیماری بورس عفونی میباشد

کلیدواژه ها:

ویروس بیماری بورس عفونیIBDV ، پروتیین VP3 ، کلونینگ ، پلاسمیدpMal-C2 X